Rimozione del pupario degli insetti: un metodo per l'indagine sulle pupe

In questo articolo

Abstract

Fonte: Fukutomi, Y., et al. Metodi per la stadiazione dei periodi pupali e la misurazione della pigmentazione delle ali di Drosophila guttifera.J. Vis. Exp. (2018).

Questo articolo descrive una tecnica per rimuovere il pupario di un insetto mantenendo intatta la pupa interna e quindi adatta per ulteriori indagini. Il protocollo di esempio mostra la procedura con Drosophila guttifera; tuttavia, questa tecnica è applicabile ad altre specie di Drosophila.

Protocollo

Questo protocollo è un estratto da Fukutomi et al., Metodi per la stadiazione dei periodi pupali e la misurazione della pigmentazione delle ali di Drosophila guttifera, J. Vis. Exp. (2018).

1. Rimozione del pupario

NOTA Le pupe di Drosophila sono coperte da una struttura chiamata puparium. Un insetto di Muscomorpha (mosche) non perde la cuticola larvale durante la pupa; Invece, indurisce la cuticola dopo l'apolisi, e la usa come copertura protettiva della pupa, il pupario. Una pupa che risiede all'interno di un pupario ha una vera cuticola pupale, che è molto morbida e fragile. Prima che l'apolisi avvenga intorno a P4(ii), epiteli e pupari sono attaccati insieme, e quindi rimuovere il pupario senza danni è molto difficile. Dopo P5, l'asportazione del pupario è laboriosa, ma utile per l'osservazione morfologica e la definizione degli stadi pupali. Il processo viene eseguito come segue.

Attacca un pezzo di nastro biadesivo su un pezzo di carta assorbente.
Posizionare una pupa sul nastro biadesivo con il lato ventrale rivolto verso l'alto (Figura 1A).
Individua lo spazio tra il lato anteriore del pupario e la pupa interna. Afferrare e rimuovere il pupario attorno a questa fessura usando una pinza ed esporre il lato anteriore della testa della pupa.
Inserire la punta di una pinza spostandola parallelamente all'asse antero-posteriore. Solleva la punta della pinza per rompere localmente il pupario. Ripetere questa azione fino a quando la rottura non raggiunge la parte posteriore del pupario. Assicurarsi che si formi anche uno spazio tra il pupario e le zampe della pupa e rompere il lato ventrale del pupario e ridurre al minimo il danno alla pupa interna (Figura 1B).
Dopo aver rotto il puparium il più possibile, estrarre la pupa usando un pennello fine (#5/0) (Figura 1C).
Posizionare la pupa su un foglio di carta velina inumidito con ddH₂O e posto in una capsula di Petri di plastica (diametro 60 mm x altezza 15 mm). Scatta fotografie il prima possibile perché la pupa esposta è vulnerabile e si secca facilmente.

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Risultati

Schema di dissezione degli insetti, fasi: taglio e rimozione, taglio e apertura, estrazione con pennello.
Figura 1. Illustrazione della rimozione del pupario.(A) Posizionare una pupa con il lato ventrale rivolto verso l'alto su un pezzo di nastro biadesivo. Rimuovere la parte anteriore del pupario. (B) Rompere il pupario con una pinza dal lato ventrale. (C) Dopo aver rotto il ...