Drosophila melanogaster (moscerino della frutta)

Grazie alle loro grandi dimensioni e all'organizzazione relativamente semplice, le cellule nutrici di Drosophila sono ideali per gli studi di imaging di cellule vive. Questo video descrive un metodo di microiniezione per la consegna di composti esogeni nelle cellule e il protocollo presentato mostra la procedura con sonde oligonucleotidiche fluorescenti chiamate beacon molecolari (MB) utilizzate per visualizzare i trascritti di mRNA endogeno.

L'embrione di Drosophila è circondato da membrane esterne protettive. Per accedere all'embrione, il corion, la più esterna delle membrane, viene spesso rimosso. Questo video descrive un metodo comunemente usato per la decorionazione utilizzando l'ipoclorito di sodio. Il protocollo di esempio dimostra la procedura impiegando tecniche sterili necessarie per l'allevamento di animali axenici o gnotobiotici.

L'immunocolorazione degli ovociti in fase avanzata di Drosophila può rivelarsi difficile a causa delle membrane circostanti degli ovociti. Questo video descrive un metodo ad alto rendimento per ottenere ovociti, la loro fissazione e la rimozione delle membrane per l'immunocolorazione. Il protocollo presentato dimostra queste tecniche con ovociti in fase avanzata utilizzati per visualizzare diversi stadi della meiosi.

Questo video descrive un metodo per rimuovere meccanicamente le membrane corion e vitellina da ovociti maturi di Drosophila precedentemente fissati. Il protocollo presentato mostra una dimostrazione dettagliata della procedura che produce ovociti compatibili con i saggi di ibridazione fluorescente in situ.

Questo video descrive come eseguire microiniezioni che rilasciano reagenti in embrioni vivi di Drosophila. I ricercatori possono utilizzare questo metodo per introdurre composti esogeni come acidi nucleici e proteine durante le prime fasi dello sviluppo embrionale. Il protocollo presentato dimostra come impostare ed eseguire la procedura per l'iniezione di qualsiasi reagente solubile, in questo caso una proteina fluorescente per esperimenti di imaging dal vivo.

Source:Siddarth Gunnala1, Nafisa M. Jadavji2,3,41Department of Biomedical Sciences, Midwestern University, Glendale, AZ, USA2Division of Integrative and Molecular Physiology, Department of Biomedical Sciences, Southern University of Illinois, Carbondale, IL, USA3Department of Child Health, College of Medicine Phoenix, University of Arizona, Phoenix, AZ, USA4Department of Neuroscience, Carleton University, Ottawa, ON, CanadaThis video demonstrates hypoxia-induced climbing behavior in Drosophila...

Questo video mostra un metodo per testare l'ipossia nelle larve di Drosophila valutando le loro capacità di scavare e scavare tunnel. Utilizzando questa tecnica, i ricercatori possono distinguere le larve che soffrono di privazione di ossigeno da quelle con deficit di sviluppo. Il protocollo di esempio illustra la configurazione di questo test.

Quando si colorano i dischi immaginali di Drosophila, spesso viene eseguita una dissezione grossolana in cui i dischi sono esposti ma rimangono attaccati al corpo. Una volta colorati, i dischi di interesse vengono isolati e montati. Il protocollo di esempio dimostra una procedura per la dissezione e il montaggio del disco immaginale dell'ala.

La giunzione neuromuscolare della Drosophila (NMJ) viene utilizzata come modello per studiare la morfologia e la funzione delle sinapsi. Questo video descrive importanti caratteristiche che i ricercatori quantificano per caratterizzare l'NMJ. Il protocollo di esempio mostra un software in grado di eseguire la quantificazione automaticamente.

Questo video descrive l'ablazione laser a due fotoni degli assoni in una larva di Drosophila melanogaster e un protocollo di esempio per indurre lesioni e visualizzare il sito della lesione.

Questo video descrive come preparare i filetti larvali utilizzati per visualizzare i neuroni dell'arborizzazione dendritica sensoriale (da) e le cellule epidermiche associate. Il protocollo presentato mostra in dettaglio come rimuovere il tessuto muscolare dalla parete corporea preservando la morfologia delle cellule, il che migliora l'immunocolorazione e la visualizzazione dei neuroni da e delle cellule epidermiche altrimenti oscurate.

L'emolinfa di Drosophila funge sia da sangue che da liquido interstiziale, circolando in tutto il corpo durante gli stadi larvali e adulti. Questo video descrive un protocollo per raccogliere l'emolinfa larvale al fine di quantificare le cellule circolanti.

Le larve di Drosophila sono sensibili alla luce e rispondono ai cambiamenti della luce circostante. Questo video descrive un test che verifica la loro capacità di evitare la luce, chiamato saggio del punto luminoso. Il protocollo presentato mostra come impostare il test con un LED a luce blu e mostra come registrare il comportamento dell'animale in risposta all'incontro con la luce.

Questo video descrive la ghiandola ad anello di Drosophila, una complessa struttura endocrina importante per la biosintesi e la secrezione di ecdisteroidi e altri ormoni. Il protocollo presentato ne dimostra la dissezione, la fissazione e l'immunocolorazione.

Le larve di Drosophila hanno neuroni sensoriali dedicati, nocicettori, la cui risposta a stimoli termici potenzialmente dannosi innesca comportamenti avversivi, o cosiddetti "nocifensivi", nell'animale. Questo video descrive un metodo per valutare la nocicezione termica registrando il comportamento larvale in risposta all'applicazione locale di una sonda termica sulla cuticola. Questo metodo è quindi chiamato saggio della sonda di calore locale.

I moscerini della frutta Drosophila possono distinguere piccoli cambiamenti di temperatura e quindi selezionare ambienti con condizioni termiche favorevoli. Questo video descrive un test comportamentale che verifica la preferenza di temperatura delle larve di Drosophila su un gradiente termico lineare.

Questo video descrive la ghiandola linfatica di Drosophila, il sito primario dell'emopoiesi nella larva di mosca, e mostra un esempio di protocollo per sezionare e montare l'organo per l'immunoistochimica e l'imaging fluorescente.

Questo articolo descrive una tecnica per rimuovere il pupario di un insetto mantenendo intatta la pupa interna e quindi adatta per ulteriori indagini. Il protocollo di esempio mostra la procedura con Drosophila guttifera; tuttavia, questa tecnica è applicabile ad altre specie di Drosophila.

Questo video descrive come sezionare e isolare il complesso occhio-cervello dalle pupe di Drosophila. Il protocollo presentato dimostra che la procedura produce tessuto di alta qualità, compatibile, ad esempio, con l'immunocolorazione e con altri esperimenti di espressione genica.

I muscoli di volo della Drosophila sono utilizzati come sistema modello per lo sviluppo muscolare e la fisiologia. Questo video descrive la muscolatura di volo degli adulti e mette in evidenza un protocollo per sezionare lo sviluppo di muscoli di volo indiretti adatti al sequenziamento dell'RNA dalle pupe.

Questo video descrive un classico test di condizionamento che mette alla prova l'apprendimento e la memoria in Drosophila, chiamato condizionamento del corteggiamento. Il test si basa sulla riduzione del corteggiamento maschile dopo aver sperimentato un rifiuto da parte di una femmina preaccoppiata non ricettiva. Il protocollo di esempio mostra una configurazione per la procedura che può essere utilizzata per valutare la memoria a breve e lungo termine.

Questo video descrive un metodo semplice per quantificare la locomozione delle mosche e mostra il saggio di arrampicata eseguito. Il test di arrampicata sulle mosche è un test generale della funzione motoria che si basa su una risposta negativa della geotassi.

Questo video descrive la dissezione delle ghiandole accessorie dai moscerini maschi e mostra un esempio in cui la ghiandola isolata sarà dissociata in una sospensione a singola cellula.

Questo video descrive l'anatomia generale dell'ovaio di Drosophila e presenta un metodo di dissezione delle ovaie per l'imaging dal vivo o fisso.

Questo articolo descrive la dissezione dei tubuli Malpighian anteriori (MT) da una femmina di mosca Drosophila e un esempio di protocollo da Rossano et al. (2017) in cui le MT vengono preparate per l'imaging dal vivo in una camera di perfusione.

Questo video descrive il test dell'isola, un metodo comportamentale utilizzato per studiare la locomozione della Drosophila. Il protocollo di campionamento presenta una configurazione per il test compatibile con l'analisi semiautomatica delle immagini.

Gli scienziati utilizzano il protocollo della durata della vita della Drosophila per misurare come le diverse condizioni sperimentali influenzano la longevità delle mosche e generare curve di sopravvivenza nel processo per quantificare i risultati sperimentali. Il protocollo del campione prevede l'applicazione del test per studiare gli effetti sulla longevità derivanti dall'esposizione a concentrazioni variabili di sostanze chimiche interferenti endocrini, o EDC, come il 17-α-etinilestradiolo...

Questo video descrive un test di alimentazione per moscerini della frutta in cui il cibo colorato viene utilizzato per monitorare l'alimentazione e l'effetto che i composti aggiunti possono avere sull'attività di alimentazione. Il protocollo di esempio verifica gli effetti di diverse sostanze chimiche che alterano il sistema endocrino (EDC).

Questo video descrive un metodo per montare cervelli intatti da mosche adulte sotto un scivolo da ponte e mostra il protocollo eseguito su cervelli immunocolorati per la microscopia fluorescente.

Questo video descrive un metodo di screening per identificare le mosche transgeniche Drosophila, il cui genoma è stato modificato utilizzando CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 è un potente strumento di editing del genoma che ha rivoluzionato il modo in cui gli scienziati possono manipolare il genoma di un organismo. Nel protocollo di esempio, vedremo come identificare mutanti generati da CRISPR, in cui l'inserimento di una sequenza di transattivazione sostituisce il primo esone del gene branchless...

La microscopia elettronica a scansione (SEM) è un potente strumento per visualizzare, principalmente, le caratteristiche superficiali di un campione biologico. Una corretta preparazione del campione, tuttavia, è fondamentale per ottenere immagini di qualità. Questo video si concentra sulle fasi di disidratazione e asciugatura della preparazione della Drosophila adulta intatta per il SEM.

Questo video descrive come incorporare le teste di Drosophila nella paraffina usando il metodo del collare, una tecnica che prepara le teste di mosca per il sezionamento seriale. Le sezioni di paraffina sono utilizzate per gli esami istologici dell'anatomia del cervello e per la valutazione della neurodegenerazione. Il protocollo presentato dimostra come sia possibile elaborare più mosche in un'unica preparazione, aumentando così l'efficienza in termini di tempo e riducendo al minimo gli...

Questo video descrive come eseguire un'iniezione di mosche adulte vive e include un protocollo di esempio in cui le particelle marcate e il blu di tripano vengono iniettati negli addomi delle mosche per analizzare la fagocitosi.

Questo video descrive il saggio delle preferenze gustative, un metodo comportamentale utilizzato per misurare l'attrazione o l'evitamento verso soluzioni colorate che hanno un sapore diverso valutando la colorazione addominale della mosca dopo l'ingestione della sostanza preferita. Il protocollo presentato dimostra la procedura utilizzata per misurare la preferenza dei moscerini verso soluzioni con concentrazioni variabili di saccarosio.

Questo video descrive il test CApillary FEeder, o CAFE, un metodo comportamentale che misura l'assunzione di cibo e la preferenza dei moscerini della frutta non frenati. Il protocollo presentato mostra come eseguire il test con un'evaporazione minima dai capillari pieni di liquido utilizzati per erogare il cibo e monitorarne l'assunzione.

Questo video descrive come sezionare e isolare il cervello adulto di Drosophila, una procedura necessaria per visualizzare l'organo, che altrimenti è oscurato dalla cuticola, dall'occhio e dal tessuto tracheale. Il protocollo di esempio mostra una dimostrazione dettagliata che produce preparati di alta qualità che possono essere utilizzati per l'immunocolorazione e i metodi di imaging nella neurobiologia della Drosophila.

Il microbiota della Drosophila influisce sullo sviluppo, l'immunità e la fisiologia dell'animale. Questo video descrive un metodo per quantificare i batteri delle mosche determinando le unità formanti colonie da preparati di tutto il corpo. Il protocollo presentato dimostra la tecnica con le mosche, allevate in condizioni gnotobiotiche utilizzando quattro specie batteriche.

Questo video descrive un metodo per sezionare, fissare e montare la zampa adulta di Drosophila preservando intatta la sua neuromuscolatura per l'analisi di imaging.

Questo video descrive come seguire le mosche che camminano liberamente per valutare la loro capacità generale di locomozione. Il protocollo presentato dimostra la configurazione del test e l'analisi dei dati utilizzando un software di tracciamento video.

Questo video descrive un metodo per costruire un aspiratore di mosche, che può essere utilizzato per trasferire insetti tra recinti senza anestesia. L'aspiratore nel protocollo di esempio è stato preparato per un esperimento per quantificare i comportamenti individuali di...

Questo video descrive l'imaging del calcio in vivo nei neuroni di Drosophila utilizzando GCaMP. La clip del protocollo in primo piano mostra come registrare i cambiamenti nella fluorescenza GCaMP dai neuroni del corpo a fungo durante un esperimento di condizionamento olfattivo.

I moscerini della frutta hanno un sistema olfattivo complesso, possono discriminare centinaia di odori e usano il loro senso dell'olfatto per indirizzare le decisioni comportamentali. Questo video descrive il test dell'olfattometro a quattro vie, un metodo per studiare le risposte comportamentali olfattive nei moscerini. La clip del protocollo in primo piano mostra come gestire le mosche di prova e quali sono i passaggi critici durante l'esecuzione del test.

L'aggressività è un comportamento innato e l'esperienza di combattimento precedente influenza la strategia di combattimento e l'esito delle successive gare di mosche. Questo video descrive un test utilizzato per studiare il comportamento aggressivo della Drosophila. Il protocollo di esempio prevede che il test venga eseguito in una configurazione che elimina la manipolazione delle mosche e quindi riduce lo stress per gli animali, che altrimenti influirebbe sulle prestazioni dei soggetti.

Questo video descrive un metodo per testare il comportamento esplorativo olfattivo nel moscerino della frutta, chiamato labirinto a Y. La clip del protocollo in primo piano mostra come impostare ed eseguire il test.

Questo video descrive il sistema di monitoraggio dell'attività di Drosophila (DAM) utilizzato per monitorare l'attività locomotoria. I ricercatori utilizzano i dati sull'attività raccolti dal DAM per studiare i ritmi circadiani nei moscerini della frutta. La clip del protocollo in primo piano mostra come caricare le mosche nel dispositivo e registrare i dati di attività per gli esperimenti circadiani.

L'optogenetica consente l'uso della luce per manipolare neuroni geneticamente modificati per esprimere opsine specifiche, proteine sensibili alla luce la cui attivazione della luce innesca un cambiamento nello stato del neurone. Qui descriviamo un approccio optogenetico in Drosophila utilizzando l'opsina Channelrhodopsin2. Il protocollo di esempio presenta un set di test di optogenetica per studiare i circuiti neuronali dietro il comportamento di fuga della mosca.

In questo video, evidenziamo una dissezione dell'intestino adulto di Drosophila e una raccolta di intestino medio adatto alla dissociazione di singole cellule e FACS al fine di isolare le cellule staminali intestinali.

Questo video descrive il cuore adulto della mosca, o altrimenti chiamato il vaso dorsale della Drosophila. Il protocollo presentato dimostra una procedura di dissezione per preparazioni cardiache vive.

Le femmine di Drosophila scelgono tra i substrati e selezionano i siti che sono attraenti per la deposizione delle uova. Questo video descrive un test comportamentale che mette alla prova il loro processo decisionale, chiamato saggio delle preferenze di deposizione delle uova. La clip in primo piano mostra la procedura con una configurazione personalizzata, che consente ai ricercatori non solo di testare il comportamento di molte femmine allo stesso tempo, ma è anche compatibile con la...