Generazione di sferoidi da linee cellulari: un metodo di coltura cellulare tridimensionale (3D)

Abstract

Fonte: Dillard, P., et al. Un saggio di uccisione degli sferoidi da parte delle cellule T CAR. J. Vis. Exp. (2018).

Gli sferoidi sono un tipo di modello di coltura cellulare 3D utilizzato per rappresentare in modo più accurato l'ambiente di una cellula rispetto ai modelli monostrato di coltura cellulare 2D. Nel protocollo di esempio, vedremo gli scienziati generare sferoidi da una linea cellulare di cancro del colon-retto e applicare l'imaging di cellule vive per monitorare la crescita degli sferoidi.

Protocollo

1. Generazione di sferoidi da una linea cellulare di cancro del colon-retto

1. Lavare i monostrati cellulari HCT 116 (trasdotto stabilmente per esprimere il cluster di differenziazione 19 (CD19) e la proteina di fluorescenza verde (GFP)) con soluzione salina tamponata con fosfato (PBS; 5 mL per un pallone da 25 cm² o 10 mL per un matraccio da 75 cm²). Aggiungere la tripsina (0,5 mL per un pallone da 25 cm² o 1 mL per un pallone da 75 cm²) e incubare le cellule a 37 °C per 5 min.
2. Controllare il distacco cellulare al microscopio e neutralizzare l'enzima di dissociazione cellulare con il terr....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
La soluzione salina tamponata al fosfato di Dulbecco	SIGMA-ALDRICH	D8537-500ML	Numero di lotto: RNBG7037
75 cm² fiaschette per l'area di crescita	VWR	430639	Numero di lotto: 2218002
75 cm² fiaschette per l'area di crescita	VWR	734-2705	Numero di lotto: 3718006
Trypsin-EDTA	SIGM-ALDRICH	T3924-100ml	Numero di lotto: SLBTO777
RPMI 1640 med L-glutammina, 10 x 500 mL	Tecnologia di vita (Gibco)	Codice 21875-091	Numero di lotto: 1926384
Gentamicin	Thermo Fischer	15750060	Numero di lotto: 1904924A
Soluzione blu di tripano, 0.4%	Thermo Fischer	15250061	Numero di lotto: 1886513
Piastra da 96 pozzetti, fondo rotondo	VWR	734-1797	Numero di lotto: 33117036
X-VIVO 15 con Gentamicina L-Gln, Rosso Fenolo, 1 L	BioNordika	BE02-060Q	Numero di lotto: 8MB036
Serbatoio dei reagenti	VWR	Codice 89094-672	Numero di lotto: 89094-672
15 mL di provette	VWR	734-1867	Numero di lotto: 19317044
Siero Bovino Fetale	Gibco	10500064	Numero di lotto: 08Q3066K
HCT 116 Linea di Carcinoma Colorettale	ATCC	CCL-247	-
Incucyte S3	Essen Bioscience