Saggio di arrampicata volante: un metodo per testare la locomozione generale in Drosophila melanogaster

Abstract

Fonte: Gevedon, O., et al. Screening genetico in vivo per identificare nuovi geni neuroprotettivi in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video descrive un metodo semplice per quantificare la locomozione delle mosche e mostra il saggio di arrampicata eseguito. Il test di arrampicata sulle mosche è un test generale della funzione motoria che si basa su una risposta negativa della geotassi.

Protocollo

Questo protocollo è un estratto da Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis.(2019).

1. Saggio rampicante (Adattato da Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. Convalidare il test di arrampicata. In questo studio, testare il test di arrampicata basato sulla metodologia precedentemente descritta da Ali et al., utilizzando le mosche Elav^C155>UAS-Tau^R406W (che mostrano tassi di passaggio di arrampicata inferiori) e le mosche Elav^C155>UAS-GFP (controllo) e Elav^C155>UAS-mCherry (controllo).
2. Capovolgere le mosche in una camera di prova, una linea alla volta (non usare l'anestesia con CO₂) e lasciarle recuperare per 5 minuti. Se il test viene eseguito in giorni diversi, eseguire il test alla stessa ora del giorno. In questo studio, tutti i saggi di arrampicata sono stati eseguiti nel pomeriggio per controllare gli effetti circadiani sulla locomo>NOTA Evita di esporre le mosche alla luce solare diretta durante il test; Ciò interferirà con la loro capacità di arrampicarsi.
3. Battere con forza la camera (con il lato contrassegnato verso il basso) su un tappetino per mouse posizionato su una superficie solida 3 volte in modo che tutte le mosche inizino il saggio dal basso. Osservare la locomozione della mosca per un periodo di 10 s.
4. Registrare il numero di mosche che raggiungono o superano la linea dei 5 cm entro questo tempo, nonché il numero totale di mosche testate. Ripetere il protocollo, attendendo 1 minuto tra una prova e l'altra, per un minimo di 3 repliche di prova per riga.
   NOTA Nel presente studio, ogni fiala conteneva tra 2 e 19 mosche per lo screening iniziale (mosche maschi) e tra 6 e 21 mosche per l'analisi del deficit mutante delle linee femminili incrociate.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Fiala VWR® Drosophila; Stretto	VWR	75813-160
Nastro per Etichettatura da Laboratorio per Uso Generico VWR®	VWR	Codice 89097-912
Tappetino per mouse standard
Stereoscopio	Motico		Modello SMZ-168
Incubatrice di Drosophila	VWR	89510-750
R