Questo protocollo è un estratto da Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis.(2019).
1. Saggio rampicante (Adattato da Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))
<ol>
	<li>Convalidare il test di arrampicata. In questo studio, testare il test di arrampicata basato sulla metodologia precedentemente descritta da Ali et al., utilizzando le mosche ElavC155>UAS-TauR406W (che mostrano tassi di passaggio di arrampicata inferiori) e le mosche ElavC155>UAS-GFP (controllo) e ElavC155>UAS-mCherry (controllo).</li>
	<li>Capovolgere le mosche in una camera di prova, una linea alla volta (non usare l'anestesia con CO2) e lasciarle recuperare per 5 minuti. Se il test viene eseguito in giorni diversi, eseguire il test alla stessa ora del giorno. In questo studio, tutti i saggi di arrampicata sono stati eseguiti nel pomeriggio per controllare gli effetti circadiani sulla locomo><zione.
	NOTA Evita di esporre le mosche alla luce solare diretta durante il test; Ciò interferirà con la loro capacità di arrampicarsi.</li>
	<li>Battere con forza la camera (con il lato contrassegnato verso il basso) su un tappetino per mouse posizionato su una superficie solida 3 volte in modo che tutte le mosche inizino il saggio dal basso. Osservare la locomozione della mosca per un periodo di 10 s.</li>
	<li>Registrare il numero di mosche che raggiungono o superano la linea dei 5 cm entro questo tempo, nonché il numero totale di mosche testate. Ripetere il protocollo, attendendo 1 minuto tra una prova e l'altra, per un minimo di 3 repliche di prova per riga. 
	NOTA Nel presente studio, ogni fiala conteneva tra 2 e 19 mosche per lo screening iniziale (mosche maschi) e tra 6 e 21 mosche per l'analisi del deficit mutante delle linee femminili incrociate.</li>
</ol>

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1448px;" width="1449">
	<tbody>
		<tr altezza="19">
			<td height="19" style="height:20px;width:572px;">Fiala VWR® Drosophila; Stretto</td>
			<td style="larghezza:310px;">VWR</td>
			<td style="larghezza:147px;">75813-160</td>
			<td style="larghezza:420px;"></td>
		</tr>
		<tr altezza="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Nastro per Etichettatura da Laboratorio per Uso Generico VWR®</td>
			<td>VWR</td>
			<td>Codice 89097-912</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr altezza="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Tappetino per mouse standard</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr altezza="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Stereoscopio</td>
			<td>Motico</td>
			<td></td>
			<td>Modello SMZ-168</td>
		</tr>
		<tr altezza="19">
			<td height="19" style="height:20px;">Incubatrice di Drosophila</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89510-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr altezza="19">
			<td height="19" style="height:20px;"Pacchetto software >R</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

saggio di arrampicata volante: un metodo per testare la locomozione generale in drosophila melanogaster

Fly Climbing Assay: A Method to Test General Locomotion in Drosophila melanogaster

Fonte: Gevedon, O., et al. <a href="https://www.jove.com/video/59720/in-vivo-forward-genetic-screen-to-identify-novel-neuroprotective">Screening genetico in vivo per identificare nuovi geni neuroprotettivi in Drosophila melanogaster</a>. J. Vis. Exp. (2019).
Questo video descrive un metodo semplice per quantificare la locomozione delle mosche e mostra il saggio di arrampicata eseguito. Il test di arrampicata sulle mosche è un test generale della funzione motoria che si basa su una risposta negativa della geotassi.

Saggio di arrampicata volante: un metodo per testare la locomozione generale in Drosophila melanogaster

Fonte: Gevedon, O., et al. Screening genetico in vivo per identificare nuovi geni neuroprotettivi in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).
Questo...

-In primo luogo, ottenere un determinato numero di Drosophila adulta. La camera di prova per il saggio rampicante è composta da due fiale fissate insieme. Uno di questi flaconcini deve essere contrassegnato da una linea. Senza anestesia con anidride carbonica, che può compromettere il comportamento di arrampicata, trasferire un determinato numero di mosche nella camera di prova. Lascia che le mosche si riprendano per un periodo di tempo predeterminato. Con il lato contrassegnato della camera rivolto verso il basso, picchiettare con decisione la camera su un tappetino per mouse posizionato su una superficie solida. Questo costringerà le mosche sul fondo della camera. Il test di arrampicata sfrutta la naturale tendenza della Drosophila a salire verso l'alto contro la gravità, un comportamento chiamato geotassi negativa. Durante la prova, i moscerini non dovrebbero essere esposti alla luce solare diretta perché i moscerini potrebbero mostrare un comportamento di fototassi o un movimento in risposta a stimoli luminosi. Registra il numero di mosche che raggiungono o superano la linea. Quindi ottieni la percentuale di superamento dividendo questo numero per il numero totale di mosche testate. Lascia che le mosche si riprendano prima di ripetere la prova. Nell'esempio, osserveremo un saggio di arrampicata su mosca utilizzato per valutare la funzione motoria di Drosophila dopo mutagenesi chimica. -Per iniziare, raccogli mosche omozigoti da linee appartenenti alla collezione mutagenizzata ENU di mutanti di Drosophila mappati sul secondo cromosoma. Capovolgere le mosche di età compresa tra 10 e 12 giorni in una camera di prova senza anestesia, una linea alla volta, e lasciarle riprendersi per cinque minuti. Con la linea di cinque centimetri segnata con il lato rivolto verso il basso, picchiettare con forza la camera tre volte su un tappetino per mouse posizionato su una superficie solida in modo che tutte le mosche inizino il saggio dal basso. Osservare la locomozione del volo per un periodo di 10 secondi. Registra il numero di mosche che raggiungono o superano la linea dei cinque centimetri entro questo tempo, nonché il numero totale di mosche testate. Attendere un minuto prima di iniziare una seconda prova. Ripetere un minimo di tre repliche di prova per riga.

fly-climbing-assay-method-to-test-general-locomotion-drosophila

Research

Ricerca

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biology

Biologia

Drosophila melanogaster (fruit fly)

Drosophila melanogaster (moscerino della frutta)

Adult

Adulto

14.0K Views. -In primo luogo, ottenere un determinato numero di Drosophila adulta. La camera di prova per il saggio rampicante è composta da due fiale fissate insieme. Uno di questi flaconcini deve essere contrassegnato da una linea. Senza anestesia con anidride carbonica, che può compromettere il comportamento di arrampicata, trasferire un determinato numero di mosche nella camera di prova. Lascia che le mosche si riprendano per un periodo di tempo predeterminato. Con il lato contrassegna...

Saggio di arrampicata volante: un metodo per testare la locomozione generale in Drosophila melanogaster

In questo articolo

Abstract

Protocollo

Materiali

Tag

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Fiala VWR® Drosophila; Stretto	VWR	75813-160
Nastro per Etichettatura da Laboratorio per Uso Generico VWR®	VWR	Codice 89097-912
Tappetino per mouse standard
Stereoscopio	Motico		Modello SMZ-168
Incubatrice di Drosophila	VWR	89510-750
R