drosofila Dissezione della ghiandola accessoria maschile: un metodo per isolare le cellule secondarie

Abstract

Fonte: Immarigeon, C., et al. Un protocollo basato su FACS per isolare l'RNA dalle cellule secondarie delle ghiandole accessorie maschili di Drosophila. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video descrive la dissezione delle ghiandole accessorie dai moscerini maschi e mostra un esempio in cui la ghiandola isolata sarà dissociata in una sospensione a singola cellula.

Protocollo

Questo protocollo è un estratto da Immarigeon et al., Un protocollo basato su FACS per isolare l'RNA dalle cellule secondarie delle ghiandole accessorie maschili di Drosophila, J. Vis. Exp. (2019).

1. Soluzioni e preparazione dei materiali

1. Prepara le seguenti soluzioni.
   1. Prepare Serum Supplemented Medium (SSM): il terreno Drosophila di Schneider è completato con il 10% di siero fetale bovino inattivato a caldo e l'1% di penicillina-streptomicina.
   2. Preparare aliquote di 1x enzima tripsina (ad es. TrypLE Express Enzyme) e conservare a temperatura ambiente.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Microscopio binoculare per dissezione
Binocolo con sorgente luminosa per GFP
Bunsen
Microprovette in plastica da 1,5 mL	Eppendorf
Pinza per dissezione fine
Siero fetale bovino	Gibco	Codice 10270-106	calore inattivato prima dell'uso
Piatti di vetro per la dissezione
Secchiello per il ghiaccio
P1000	Gilson
P20	Gilson
P200	Gilson
papaina			50U/mL di riserva
Pbs			fatto in casa
Penicillina-Streptomicina	Gibco	Codice 15070-063
Drosophila medium di Schneider	Gibco	Codice 21720-001
Puntale graduato Tipone da 1250 μL	Laboratorio stellare	S1161-1820
Tipone 200 μL puntale smussato	Laboratorio stellare	S1161-1800
Enzima TrypLE Express	Gibco	12604013