Screening per le modifiche genomiche: un metodo per identificare i mutanti generati da CRISPR in Drosophila

In questo articolo

Abstract

Fonte: Du, L., et al. Una strategia efficiente per la generazione di sistemi di trascrizione binaria tessuto-specifici in Drosophila mediante l'editing del genoma. J. Vis. Exp. (2018).

Questo video descrive un metodo di screening per identificare le mosche transgeniche Drosophila, il cui genoma è stato modificato utilizzando CRISPR-Cas9. CRISPR-Cas9 è un potente strumento di editing del genoma che ha rivoluzionato il modo in cui gli scienziati possono manipolare il genoma di un organismo. Nel protocollo di esempio, vedremo come identificare mutanti generati da CRISPR, in cui l'inserimento di una sequenza di transattivazione sostituisce il primo esone del gene branchless (bnl), creando così una linea driver specifica per il gene bnl, bnl-LexA.

Protocollo

Questo protocollo è un estratto da Du et al., Una strategia efficiente per la generazione di sistemi di trascrizione binaria specifici per i tessuti in Drosophila mediante l'editing del genoma, J. Vis. Exp. (2018).

1. Genetica e screening delle mosche (Figura 1 e Figura 2)

Quando gli embrioni iniettati si sviluppano in adulti, incrocia ogni singola mosca G₀ con mosche bilanciatrici. Selezionare il bilanciatore adatto per il cromosoma contenente l'allele bersaglio.
Anestetizzare la prole F1 da ogni incrocio G0 su un tampone di CO₂ e scegliere casualmente 10-20 maschi sott....

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Risultati

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Figura 1: Una panoramica del flusso di lavoro per l'editing del genoma mediato da CRISPR/Cas9 per generare un sistema di trascrizione binario. Viene indicata la durata approssimativa del tempo necessario per ogni passaggio. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.