Iniezione di mosche Drosophila adulte: un metodo di consegna del composto o dell'etichetta

Abstract

Fonte: Nazario-Toole, A. E., Wu, L. P. Valutazione della risposta immunitaria cellulare del moscerino della frutta, Drosophila melanogaster, utilizzando un test di fagocitosi in vivo. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video descrive come eseguire un'iniezione di mosche adulte vive e include un protocollo di esempio in cui le particelle marcate e il blu di tripano vengono iniettati negli addomi delle mosche per analizzare la fagocitosi.

Protocollo

Questo protocollo è un estratto da Nazario-Toole e Wu, Valutazione della risposta immunitaria cellulare del moscerino della frutta, Drosophila melanogaster, utilizzando un saggio di fagocitosi in vivo, J. Vis. Exp. (2019).

1. Prepara le particelle di fluoresceina per l'iniezione

1. Ricostituire 10 mg di particelle batteriche uccise termicamente disponibili in commercio marcate con fluoresceina (vedere la Tabella dei materiali) a una concentrazione stock di 10 mg/mL aggiungendo 990 μL di 1x PBS sterile e 10 μL di 50 mM di azoturo di sodio. Vortice per mescolare.
   1. Dividere in ali....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
5430-10 Kit PicoNozzle	World Precision Instruments	5430-10	Supporto per pipetta da 1.0mm
E. coli (Ceppo K-12) Bioparticelle, Coniugato di fluoresceina	Invitrogen	E2861	Ucciso E. coli marcato con FITC (Fluoresceina). Utilizzare per testare il riconoscimento dei fagociti e l'assorbimento dei batteri gram-negativi. (~494/~518 nm)
Estrattore per pipette ad ago	Strumenti di David Kopf	Modello 725
Pompa PicoPneumatica PV820	World Precision Instruments	SYS-PV820	La PicoPump pneumatica PV820 di World Precision Instruments utilizza pressioni differenziali per trattenere il liquido nell'ago di vetro tra un'iniezione e l'altra. L'utente controlla manualmente brevi raffiche di pressione del gas per espellere il liquido, consentendo l'erogazione di volumi inferiori ai nanolitri. La quantità di liquido erogato dipende da due variabili principali: la dimensione dell'apertura dell'ago di vetro e la quantità di tempo di applicazione della pressione di iniezione. impostare lo strumento su 100 ms in modalità "TIMED".
Capillari in vetro a parete sottile	World Precision Instruments	TW100F-3	Aghi per iniezione. OD = 1,0 mm
Soluzione di blu di tripano (0.4%)	Sigma	T8154	Utilizzato per spegnere la fluorescenza extracellulare di particelle marcate con Fluoresceina, Alexa Fluor o Texas Red.