Preparazione del filetto larvale: un metodo per visualizzare i neuroni sensoriali intatti e le cellule epidermiche associate

In questo articolo

Abstract

Fonte: Tenenbaum, C. M., Gavis, E. R. Rimozione del tessuto muscolare di Drosophila dai filetti larvali per l'analisi dell'immunofluorescenza dei neuroni sensoriali e delle cellule epidermiche. J. Vis. Exp. (2016).

Questo video descrive come preparare i filetti larvali utilizzati per visualizzare i neuroni dell'arborizzazione dendritica sensoriale (da) e le cellule epidermiche associate. Il protocollo presentato mostra in dettaglio come rimuovere il tessuto muscolare dalla parete corporea preservando la morfologia delle cellule, il che migliora l'immunocolorazione e la visualizzazione dei neuroni da e delle cellule epidermiche altrimenti oscurate.

Protocollo

Questo protocollo è un estratto da Tenenbaum e Gavis, Rimozione del tessuto muscolare di Drosophila dai filetti larvali per l'analisi dell'immunofluorescenza dei neuroni sensoriali e delle cellule epidermiche, J. Vis.(2016).

NOTA: La procedura per la rimozione del muscolo (Figura 1) è una modifica dei metodi precedentemente descritti per la preparazione dei filetti larvali. I passaggi che precedono e seguono la rimozione muscolare sono delineati brevemente e il lettore è rimandato a lavori precedenti in Brent, et al., J. Vis. Exp. (2009) e Karim e Moore,<....

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Risultati

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Figura 1: Panoramica della procedura di rimozione muscolare. Una larva viene sezionata e fissata a un piatto di dissezione in elastomero siliconico. Per rimuovere il tessuto muscolare, un polo a pinza viene inserito tra il muscolo e lo strato cellulare epidermico, a partire dalla linea mediana dorsale vicino al confine di un segmento (2.2). La pinza viene tirata verso l'alto per rompere l'attacco tra il muscolo e la pare.......