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Questo protocollo è un estratto da Koyle et al., Allevamento del moscerino della frutta Drosophila melanogaster in condizioni assiniche e gnotobiotiche, J. Vis.(2016).
1. Prepara le gabbie per la deposizione delle uova
- Prepara i piatti di agar per il succo d'uva cuocendo nel microonde 100 ml di acqua, 10 g di lievito di birra, 10 g di glucosio e 1 g di agar. Portare a ebollizione 3 volte al punto 1.1 e aggiungere 10 g di concentrato di succo d'uva congelato per aumentare la visibilità delle uova sulla piastra agar.
- Quando l'agar si è raffreddato a 55 °C, versare 20 ml in piastre di Petri da 100 mm e lasciare solidificare.
- Coprire la superficie delle piastre di agar con una pasta di lievito mescolando 1 g di lievito di birra con 15 g di acqua. Versare la pasta di lievito sulla piastra di agar assicurandosi che la superficie sia coperta, quindi versare l'eccesso, lasciando dietro di sé un sottile residuo di lievito. Se si utilizzano più piastre, la pasta può essere versata in sequenza su più piastre.
- Trasferire le piastre di agar sul fondo di una gabbia.
NOTA: Un contenitore per gastronomia da 32 once è un buon sostituto delle gabbie per mosche in acrilico.
- Crea coperchi per contenitori per gastronomia da 32 once tagliando un foro nella parte superiore e incollando una rete traspirante sopra il foro con colla atossica. Se la colla è solubile in acqua, evitare l'esposizione dell'acqua al coperchio.
- Trasferire 200-300 mosche nel contenitore e coprire con il coperchio. Coprire il foro protetto da rete con un coperchio di Petri vuoto per evitare l'evaporazione dalla superficie dell'agar e, se lo si desidera, aggiungere una carta velina umida all'interno del coperchio. Incubare le mosche a 25 °C durante la notte per 16-20 ore.
2. Raccogli le uova
- Prepara un setaccio per la raccolta delle uova inserendo una rete di nylon in una boccola di plastica.
- Per recuperare il piatto con le uova, rimuovere le mosche dalla gabbia trasferendole in un contenitore vuoto. Se il giorno successivo verranno utilizzate le stesse mosche, trasferirle immediatamente in una nuova gabbia contenente una piastra di agar per succo d'uva appena lievitata. Le mosche possono essere utilizzate per 3-5 giorni consecutivi
- Rimuovi le mosche morte dall'agar con un pennello pulito, facendo attenzione a non rompere l'agar.
- Raccogli le uova sciacquando la piastra di agar con acqua distillata, spazzolando delicatamente le uova dalla superficie dell'agar e versando l'impasto sulla rete. Ripetere 3-4 volte fino a quando tutte o la maggior parte delle uova sono state rimosse dalla piastra di agar.
3. Uova decorionate e trasferimento a dieta sterile
- Preparare la cabina di biosicurezza spruzzando l'interno (compresi i lati) con etanolo al 70%. Pulire il fondo con un fazzoletto da laboratorio e sterilizzare la cappa con luce UV per ~15 minuti. Sterilizzare tutte le forniture non biologiche (coppette per campioni, pennello, pinze, contenitore per rifiuti, 400 ml di acqua sterilizzata e 100 ml di ipoclorito di sodio allo 0,6%) spruzzando con etanolo e posizionandole immediatamente nella cabina di biosicurezza. Sterilizzare con luce UV per 15 min.
- Iniziare il primo dei 2 lavaggi con ipoclorito di sodio posizionando la boccola con le uova in una tazza per campioni da 120 ml o in un altro contenitore sterile. Versare lentamente ~90 ml di soluzione di ipoclorito di sodio allo 0,6% nella boccola fino a poco sotto il bordo.
- Sciacquare le uova per 2,5 minuti. Risospendere periodicamente le uova usando una pinza per muovere la boccola su e giù nella soluzione di ipoclorito.
- Trasferire la boccola direttamente in una seconda tazza per campioni, pre-riempita con 90 ml di candeggina, all'interno della cabina di biosicurezza.
- Ripetere il passaggio 3.3 all'interno della cabina di biosicurezza. Al termine del secondo trattamento di candeggina, le uova dovrebbero iniziare ad aderire ai lati della boccola.
- Eseguire i passaggi 3.7-3.8 nella cabina di biosicurezza.
- Scartare la candeggina e lavare la boccola con acqua sterile 3 volte. Risospendere le uova più volte durante ogni lavaggio muovendo la boccola con una pinza. Entro la fine del terzo lavaggio, la maggior parte delle uova dovrebbe essere attaccata al lato della boccola.
- Utilizzando un pennello sterilizzato in etanolo, trasferire le uova dal lato della boccola alla dieta sterile. Trasferire le uova singolarmente o in piccoli lotti. Punta a 30-50 uova per fiala. Lasciare i tappi allentati per consentire all'ossigeno di entrare nel tubo.