Elaborazione delle zampe degli insetti per la microscopia a fluorescenza: un metodo per preservare le strutture neuromuscolari per l'imaging

Abstract

Fonte: Guan, W., et al. Visualizza gli assoni dei motoneuroni delle gambe di Drosophila attraverso la cuticola adulta. J. Vis. Exp. (2018).

Questo video descrive un metodo per sezionare, fissare e montare la zampa adulta di Drosophila preservando intatta la sua neuromuscolatura per l'analisi di imaging.

Protocollo

Questo protocollo è un estratto da Guan et al., Visualize Drosophila Leg Motor Neuron Axon Through the Adult Cuticle, J. Vis.(2018).

1. Dissezione e fissazione delle gambe

1. Prendi una piastra multipozzetto di vetro e riempi un numero appropriato di pozzetti con il 70% di etanolo. Aggiungere 15-20 mosche anestetizzate con CO₂ (di entrambi i sessi e di qualsiasi età) in ciascun pozzetto e, utilizzando un pennello, tamponare delicatamente le mosche nella soluzione di etanolo fino a quando le mosche non sono completamente sommerse.
   NOTA: Questo passaggio consi....

Risultati

Figura 1: Procedura per il montaggio delle gambe sui vetrini del microscopio. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Etanolo assoluto	pescatore	E/6550DF/17	Grado assoluto del reagente analitico
Detergente tensioattivo non ionico	Sigma-Aldrich	T8787	Triton X-100, per biologia molecolare
Pinze fini	Sigma-Aldrich	F6521	Pinze per gioiellieri, Dumont n. 5
Piastra multipozzetto in vetro	Scienze della microscopia elettronica	Codice: 71563-01	Pyrex a 9 cavità, 100 mm x 85 mm
PFA	Thermofisher	Codice 28908	Pierc 16% Formaldeide (p/v), senza metanolo
glicerolo	Fisher BioReagenti	BP 229-1	Glicerolo (Biologia Molecolare)
Distanziali	Sun Jin Lab Co	IS006	iSpacer, quattro pozzetti, circa 12 μL di volume di lavoro per pozzetto, diametro 7 mm, profondità 0,18 mm
Vetrini coprioggetti quadrati da 22 mm x 22 mm	Fisher Scientifico	FIS#12-541-B	N. da 1,5-0,16 a 0,19 mm di spessore
Supporto di montaggio	Laboratori Vector	H-1000	Vectashield Antifade Montaggio Medio