Tracciare le mosche che camminano liberamente: un metodo per valutare la locomozione in Drosophila

Abstract

Fonte: Sun, M. e Chen, L. L. Un nuovo metodo per modellare l'encefalopatia traumatica cronica in Drosophila. J. Vis. Exp. (2017).

Questo video descrive come seguire le mosche che camminano liberamente per valutare la loro capacità generale di locomozione. Il protocollo presentato dimostra la configurazione del test e l'analisi dei dati utilizzando un software di tracciamento video.

Protocollo

Questo protocollo è un estratto da Sun e Chen, Un nuovo metodo per modellare l'encefalopatia traumatica cronica in Drosophila, J. Vis. Exp. (2017).

1. Tracciamento del movimento assistito da video

1. Riempi una piastra di Petri di 6 cm di diametro con elastomero siliconico trasparente per creare l'arena di tracciamento. Lasciare uno spazio di 3 mm tra il silicone e il coperchio del piatto per consentire alle mosche di camminare liberamente ma non di volare.
2. Anestetizzare ogni volta quattro mosche del gruppo fittizio o trattato e posizionarle nell'arena. Lasciare le mosche a 22 °C per 1 ora.
3. Posiziona una telecamera CCD (Charge-Coupled Device) sopra le arene e registra per 5 minuti.
4. Analizza le traiettorie di movimento registrate utilizzando il software Ctrax (disponibile gratuitamente da Caltech). Esporta i dati tracciati in un formato compatibile con un linguaggio di programmazione (ad esempio, Matlab) e analizza i dati in base alla distanza percorsa per fotogramma. Calcola la distanza media percorsa a piedi per ogni mosca e combinala con tutte le altre mosche/gruppo registrati per ottenere una distanza cumulativa media percorsa dalla popolazione di file nello stesso gruppo.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Piastre Petri da 60 mm	Fisher Scientifico	FB0875713A	Utilizzato come arene di tracciamento
Regolatore di flusso	Genesee Scientifico	59-122WC
Pennello fine	Genesee Scientifico	59-204
Flypad	Genesee Scientifico	59-114
Elastomero siliconico Sylgard	Dow Corning	4019862
Telecamera CCD	Valentina	HD-5000
Ctrax Tracker per mosche a piedi	Caltech	Ctrax 0.2.11
Toolbox per l'elaborazione delle immagini MATLAB	MATLAB	R2015b