Rimozione meccanica della membrana di Corion e Vitellina: un metodo per preparare gli ovociti di Drosophila per l'osservazione diretta

In questo articolo

Abstract

Fonte: Perkins, A. T., Bickel, S. E. Utilizzo dell'ibridazione in situ a fluorescenza (FISH) per monitorare lo stato di coesione del braccio negli ovociti di Drosophila in prometafase e metafase I. J. Vis. Exp. (2017).

Questo video descrive un metodo per rimuovere meccanicamente le membrane corion e vitellina da ovociti maturi di Drosophila precedentemente fissati. Il protocollo presentato mostra una dimostrazione dettagliata della procedura che produce ovociti compatibili con i saggi di ibridazione fluorescente in situ.

Protocollo

Questo protocollo è un estratto da Perkins e Bickel, utilizzando l'ibridazione in situ a fluorescenza (FISH) per monitorare lo stato di coesione del braccio negli ovociti di Drosophila in prometafase e metafase I, J. Vis. Exp. (2017).

1. Rimozione dei corioni e delle membrane vitelline

NOTA: Vedi Figura 1 per gli strumenti necessari.

Separare gli ovociti in fase avanzata
1. Aggiungere 1 ml di PBSBTx in un piatto di dissezione poco profondo. Utilizzare un P200 con punta rivestita in BSA per ....

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Risultati

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Figura 1: Strumenti di citologia. Strumenti utilizzati nel protocollo: (1) paio di pinze (#5 Dumont); (2) ago di tungsteno; (3) piatto a pozzetto profondo con coperchio; (4) piatto di dissezione in vetro poco profondo; (5) pipetta Pasteur tirata. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.