Rottura delle cuticole: un metodo per raccogliere l'emolinfa dalle larve di Drosophila

Abstract

Fonte: Reimels, T. A. e Pfleger, C. M. Metodi per esaminare la ghiandola linfatica e gli emociti nelle larve di Drosophila. J. Vis. Exp. (2016).

L'emolinfa di Drosophila funge sia da sangue che da liquido interstiziale, circolando in tutto il corpo durante gli stadi larvali e adulti. Questo video descrive un protocollo per raccogliere l'emolinfa larvale al fine di quantificare le cellule circolanti.

Protocollo

Questo protocollo è un estratto da Reimels e Pfleger, Metodi per esaminare la ghiandola linfatica e gli emociti nelle larve di Drosophila, J. Vis.(2016).

1. Concentrazione di emociti circolanti

1. Per ottenere larve all'incirca dello stesso stadio di sviluppo per questo test, limitare la raccolta delle uova consentendo alle femmine di deporre le uova per un periodo di tempo fisso di 2 - 6 ore.
2. Raccogli le larve in pozzetti per piastre di dissezione riempiti con 1x soluzione salina tamponata con fosfato (PBS).
3. Per ogni larva, mettere 10 μl di PBS in una provetta da microcentrifuga su ghiaccio e ....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Compresse PBS	MP Biomedicali	2810305
piatto di dissezione	Corning	Codice: 7220-85
provetta per microcentrifuga	Denville	Visualizzazione del materiale C2170
tampone da dissezione in silicone, realizzato con il kit Sylgard 184	Krayden (distribuito da Fisher)	NC9644388 (numero di catalogo Fisher)	Realizzato in capsula di Petri mescolando i componenti del kit di elastomeri Sylgard secondo le istruzioni del produttore.
Stereomicroscopio	Morrell Instruments (distributore Nikon)	MNA42000, MMA36300	Modelli Nikon SMZ1000 e SMZ645
salvietta per fazzoletti	VWR	82003-820
forcipe	Scienze della microscopia elettronica	72700-DZ
Pipetta P200	Eppendorf	3120000054
Contacellule automatizzato Countess	Invitrogen	Codice: C10227
Vetrini della camera di conteggio delle cellule Countess	Invitrogen	Codice: C10283
Emocitometro	Hausser Scientific	3200
Trypan macchia blu	Tecnologie per la vita	T10282