Drosophila In Vivo Imaging del calcio: un metodo per l'imaging funzionale dell'attività neuronale

Abstract

Fonte: Hancock, C. E., et al. Imaging ottico del calcio in vivo della plasticità sinaptica indotta dall'apprendimento in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video descrive l'imaging del calcio in vivo nei neuroni di Drosophila utilizzando GCaMP. La clip del protocollo in primo piano mostra come registrare i cambiamenti nella fluorescenza GCaMP dai neuroni del corpo a fungo durante un esperimento di condizionamento olfattivo.

Protocollo

Questo protocollo è un estratto da Hancock et al., In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster, J. Vis.(2019).

1. Imaging del calcio in vivo

1. Utilizzare un microscopio multifotone dotato di un laser a infrarossi e di un obiettivo a immersione in acqua (vedi Tabella dei materiali), installato su un tavolo isolato dalle vibrazioni. Per la visualizzazione di indicatori di calcio basati su GFP, sintonizzare il laser su una lunghezza d'onda di eccitazione di 920 nm e installare un filtro passa-banda GFP.
2. Utilizzando la manopola....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
1-ottano-3-olo	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Stati Uniti	O5284	Sostanza chimica usata come odorizzante
3-ottanolo	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Stati Uniti	218405	Sostanza chimica usata come odorizzante
4-metilcicloesanolo	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Stati Uniti	153095	Sostanza chimica usata come odorizzante
Filtro passa-banda per EGFP (525/50 nm)	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germania
olio minerale	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Stati Uniti	Codice: M8410	Utilizzato come diluente per odorizzanti
Laser Ti-Sapphire con blocco della modalità Chameleon Vision 2	Coherent Inc., Santa Clara, CA, Stati Uniti		Laser a femtosecondi a infrarossi sintonizzabili
Microscopio multifotone LSM 7MP dotato di rivelatori BiG	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germania		Microscopio multifotone, più aziende forniscono dispositivi simili.
Obiettivo ad immersione in acqua Plan-Apochromat 20x (NA = 1.0)	Carl Zeiss Microscopy GmbH, Jena, Germania	Numero 421452-9900-000	Obiettivo W "Plan-Apochromat" 20x/1.0 DIC M27 70mm
Software Visual Basics of Applicatons (VBA) per ricevere un trigger dal dispositivo di erogazione degli odori e dal dispositivo di applicazione della scossa elettrica (alimentatore) per interagire con il software ZEN di Zeiss che controlla il microscopio	Scritto su misura e disponibile su richiesta	n.d.	n.d.