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Questo protocollo è un estratto da Trannoy et al., Un nuovo approccio che elimina la manipolazione per studiare l'aggressività e l'effetto "perdente" in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2015).
1. Esperimento comportamentale
- Esegui gli esperimenti comportamentali con mosche maschi di 6-7 giorni.
- Inserire divisori di plastica in ogni camera di combattimento.
- Rimuovere il tappo di cotone dal tubo di isolamento e posizionare il tubo sotto un foro aperto sul lato dell'apparecchio.
- Lascia che la mosca entri nella camera di combattimento con la geotassi negativa, di solito entro pochi secondi.
- Chiudere la parete scorrevole dopo che la mosca ha lasciato il tubo ed è entrata nella camera.
- Ripetere la procedura per introdurre la seconda mosca nella camera di combattimento sull'altro lato dell'apparecchio.
- Riposizionare l'apparecchio nella posizione di videoregistrazione illuminata.
- Inizia la registrazione video e rimuovi il divisorio di plastica per consentire alle mosche di interagire.
- Per gli esperimenti di aggressione:
- In questi esperimenti, registrare i combattimenti per almeno 20 minuti per garantire la formazione di forti relazioni di dominanza.
- Trascorso il tempo desiderato, interrompere la registrazione video.
- Rimuovere le mosche dalle camere di combattimento invertendo la procedura sopra descritta.
- Lavare accuratamente l'apparato comportamentale con un detergente delicato e acqua dopo ogni utilizzo e risciacquare.
- Per gli esperimenti con l'effetto "perdente":
NOTA: In questi esperimenti, i primi combattimenti sono considerati come la fase di condizionamento e i secondi combattimenti come la fase di test. Il periodo di riposo tra i combattimenti può variare, ma 10 minuti consentono la formazione di un forte effetto "perdente".
- Segui la procedura sopra descritta per eseguire un primo combattimento.
- PASSO CRITICO: Per indurre la formazione di una mentalità da "perdente", assicurati che i primi combattimenti durino almeno 20 minuti al fine di stabilire forti relazioni di dominio. Dopo 20 minuti, reinserire il divisorio di plastica nelle camere di combattimento per separare le mosche.
- Dopo un periodo di riposo di 10 minuti, rimuovi delicatamente il divisorio di plastica per consentire alle mosche di interagire per i secondi combattimenti.
- Alla fine del secondo combattimento di 20 minuti, interrompi la registrazione video.
- Rimuovi le mosche dalle camere comportamentali come sopra.
- Ancora una volta, pulisci accuratamente l'apparato comportamentale.