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Lee e Kang, Misurazione dell'effetto delle sostanze chimiche sulla crescita e la riproduzione di Caenorhabditis elegans, J. Vis. (2017).
1. Saggio per la deposizione delle uova di C. elegans
- Incubare le uova sincronizzate per l'età sulla piastra NGM contenente DMSO o etoposide per 64 ore (prima della prima nascita) fino allo stadio di giovane adulto a 20 °C.
NOTA: È facoltativo utilizzare i vermi degli esperimenti di misurazione della crescita. È conveniente eseguire insieme la misurazione della crescita e il test di deposizione delle uova.
- Trasferire 5 vermi adulti sulle nuove piastre NGM senza sostanze chimiche (condizione 1, trattamento chimico entro un certo periodo di tempo, dalle uova allo stadio di giovane adulto) o su una nuova piastra NGM contenente lo stesso pretrattamento chimico (condizione 2, esposizione continua di sostanze chimiche durante il periodo sperimentale complessivo), quindi incubarli per 24 h.
NOTA: Si consiglia di effettuare repliche utilizzando piastre da 3-5 NGM per ogni trattamento; Queste repliche possono essere utilizzate per l'analisi statistica.
- Trasferire nella nuova piastra NGM come descritto sopra e contare il numero di uova ogni giorno. Conta i vermi che sono strisciati via, sono morti e si sono schiusi internamente.
- Ripeti questi passaggi fino a quando i vermi non depongono più uova, di solito in 5 giorni.
- Calcola il numero di uova deposte per verme da ogni piatto e somma questi valori ogni giorno per 5 giorni per determinare il numero totale di uova deposte.
NOTA: Escludere dal calcolo il numero di vermi che si sono allontanati e si sono schiusi internamente.