C. elegans Dissezione del blastomero: un metodo per rimuovere il guscio dell'uovo e dissociare le cellule embrionali

Abstract

Fonte: Hsu, C. R., et al. Ricostituzione in vitro di modelli di contatto cellulare spaziale con blastomeri embrionali isolati di Caenorhabditis elegans e perline di polistirene adesive.J. Vis. Exp.(2019).

Questo video presenta un metodo per isolare i blastomeri di C. elegans dai primi embrioni. Le cellule risultanti sono adatte per colture cellulari o esperimenti ex vivo.

Protocol

Questo protocollo è un estratto da Hsu et al, Ricostituzione in vitro di modelli di contatto cellulare spaziale con blastomeri embrionali isolati di Caenorhabditis elegans e perle di polistirene adesivo, J. Vis.(2019).

1. Isolamento del blastomero embrionale
2. Indossare guanti e camice da laboratorio per evitare tagli e contatto con la soluzione sbiancante.
   1. Tenere ciascuna estremità di un microcapillare (capacità; 10 μL) con la mano destra e sinistra.
   2. T....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Assemblaggio tubo aspiratore	Drummond	21-180-13	Per l'isolamento del blastomero.
Caenorhabditis elegans ceppo: N2, wild-type	Centro di Genetica Caenorhabditis	N2	Ceppo utilizzato in questo studio
Caenorhabditis elegans ceppo: KSG5, genotipo: zuIs45; itIs37	in casa	KSG5	Ceppo utilizzato in questo studio
Mircopipette calibrate, 10 μl	Drummond	21-180-13	Per l'isolamento dei blastomeri
CD Concentrato lipidico	Tecnologie per la vita	11905031	Per l'isolamento dei blastomeri. Lavorare nella cappa di coltura tissutale.
Clorox	Clorox	N. A.	Per l'isolamento dei blastomeri. Aprire un nuovo flacone quando il trattamento con ipoclorito non funziona bene.
Porta vetrino coprioggetti	In casa	N.A.	Per l'isolamento dei blastomeri.
Microscopio da dissezione: Zeiss Stemi 508 con supporto M. La fonte di luce è il LED incorporato. L'ingrandimento dell'oculare è 10X.	Carl Zeiss	Stemi 508	Per l'isolamento dei blastomeri.
Siero fetale bovino, One Shot qualificato, origine Canada	Gibco	A3160701	Per l'isolamento dei blastomeri. Lavorare nella cappa di coltura tissutale.
Aghi ipodermici per uso generale e scorrimento di precisione, calibro 25	Bd	14-826AA	Per l'isolamento dei blastomeri
Inulina	Alfa Aesar	AAA1842509	Per l'isolamento dei blastomeri
MEM Soluzione vitaminica (100x)	Gibco	11120052	Per l'isolamento dei blastomeri.
Multitest Vetrino 10 Pozzetti	MP Biomedicali	ICN6041805	Per l'isolamento dei blastomeri
Penicillina-streptomicina (10.000 U/mL)	Gibco	15140148	Per l'isolamento dei blastomeri.
Polivinilpirrolidone	Fisher BioReagenti	BP431-100	Per l'isolamento dei blastomeri
Cloruro di potassio	Bioshop	POC888	Per l'isolamento dei blastomeri
Terreno sterile per Drosophila	Gibco	21720024	Per l'isolamento dei blastomeri. Lavorare nella cappa di coltura tissutale.
Cloruro di sodio	Bioshop	SOD001	Per l'isolamento dei blastomeri
Soluzione di idrossido di sodio, 10 N	Fisher Chemical	SS255-1	Per l'isolamento dei blastomeri
Filtri per siringhe, PTFE, non sterili	Basix	13100115	Per l'isolamento dei blastomeri.
Tygon S3 Tubi da Laboratorio,, Formulazione E-3603, Diametro interno 3.175 mm	Plastiche ad alte prestazioni Saint Gobain	89403-862	Per l'isolamento dei blastomeri.
Tygon S3 Tubi da Laboratorio,, Formulazione E-3603, Diametro interno 6.35 mm	Plastiche ad alte prestazioni Saint Gobain	89403-854	Per l'isolamento dei blastomeri.