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Saggio di locomozione larvale: metodo ad alto rendimento per studiare la tossicità neurocomportamentale di un composto nelle larve di pesce zebra

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Zhang B., et al. Studio degli effetti neurocomportamentali degli inquinanti ambientali sulle larve di zebrafish. J. Vis. Exp. (2020)

Questo articolo descrive la risposta comportamentale del pesce zebra ai composti tossici monitorando la locomozione larvale. Il protocollo esamina inoltre un esempio di risposta delle larve di zebrafish agli inquinanti ambientali.

Protocol

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Preparazione per il test di comportamento

  1. Trasferire 800 μL di soluzione di esposizione in ogni pozzetto della micropiastra a 48 pozzetti.
    nota: Utilizzare 16 pozzetti per ogni gruppo (ad esempio, la soluzione di controllo, il gruppo da 5 μg/L e 50 μg/L).
  2. Utilizzare un puntale per pipetta da 1 mL per trasferire 200 μL di soluzione di esposizione con una larva dalla piastra di Petri in vetro in un pozzetto della micropiastra a 48 pozzetti.
  3. Trasferire 4 mL di soluzione di esposizione in ogni pozzetto della micropiastra a 6 pozzetti.
    nota: Utilizzare una micropiastra a 6 pozzetti per ogni gruppo.
  4. Utilizzare un puntale per pipetta da 1 ml per trasferire 200 μL di soluzione di esposizione con due larve in ciascun pozzetto della micropiastra a 6 pozzetti.
    nota: Ogni gruppo ha sei gruppi ripetuti.
  5. Assicurarsi che la temperatura della sala di prova sia di 28 °C 2 h prima del test.
    nota: I test comportamentali vengono solitamente eseguiti nel pomeriggio.

2. Test di locomozione e angolo di percorso

  1. Salva il protocollo e abbassa la luce della sala prove.
  2. Acclimata le larve nel sistema per 10 minuti e fai clic a turno sul pulsante "Esperimento" "Esegui", quindi scegli la cartella in cui vengono salvati i file dell'esperimento e inserisci il nome del risultato.
  3. Fare clic sul pulsante "Sfondo" "Avvia" a turno per avviare il test.
  4. Fare clic sul pulsante "Stop" "Esperimento" a turno per interrompere l'esperimento al termine del test.
    nota: Il sistema mostra i dati testati quando il sistema si ferma. I dati includono la distanza tracciata a tre classi di velocità e i numeri dell'angolo di percorso a otto classi di angolo di ogni minuto. Per il test di locomozione nell'esempio presentato, viene calcolata la distanza totale in ogni periodo di luce (10 min) e viene confrontata la differenza tra il gruppo di controllo e i gruppi di trattamento.
  5. Trasferire la micropiastra a 48 pozzetti nell'incubatore luminoso per altri esperimenti.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Micropiastra a 48 pozzetti Corning Codice: 3548Alloggiamento Embyros
Micropiastra a 6 pozzetti Corning 3471Alloggiamento Embyros
Zebrabox punto di vista Scatola Zebra Strumento di comportamento
Laboratorio Zebra punto di vista Laboratorio Zebra Software comportamentale
pipetta Eppendorf 3120000267Soluzione di trasferimento

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Zebrafish LarvaeLocomotion AssayNeurobehavioral ToxicityEnvironmental PollutantHigh Throughput MethodBehavioral TestingLight Dark CycleDistance TraveledCompound Exposure48 Well Plate

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