Dissezione intestinale adulta di pesce zebra: una tecnica per analizzare l'assorbimento dei composti

Abstract

Fonte: Jie J. et. al., Intubazione orale di pesce zebra adulto: un modello per valutare l'assorbimento intestinale di composti bioattivi. J. Vis. Exp. (2018).

Questo video descrive la tecnica di isolamento dell'intestino per valutare l'assorbimento intestinale di composti bioattivi. In questo campione, isoleremo l'intestino di un pesce zebra adulto per analizzare l'assorbimento di immunostimolanti.

Protocollo

1. Dissezione dell'intestino del pesce zebra

1. Dopo un determinato periodo di tempo dopo l'intubazione (ad esempio, 5 ore e/o 24 ore), immergere il pesce con una rete in una soluzione di 300 mg/L di etil 3-amminobenzoato metanosolfonato (MS-222) per l'eutanasia. Assicurati che l'opercolo smetta di muoversi e che non ci sia un riflesso di pizzicamento della coda. Cinque minuti sono normalmente sufficienti.
2. Raccogli l'animale soppresso con una rete e posizionalo su una carta da filtro.
   nota: La carta da filtro è molto utile per rimuovere il tessuto adesivo lungo l'intestino.
3. Usando le forbici da dissezione affilate, praticare un'incisione semicircolare dall'ano all'opercolo e aprire l'incisione con una pinzetta sottile. Tagliate entrambe le estremità dell'intestino, togliete tutti gli organi interni e metteteli sulla carta da filtro.
   cautela: Lavora rapidamente per ridurre il metabolismo cellulare e la morte.
   nota: In alternativa, rimuovere il fazzoletto adesivo in PBS e su ghiaccio.
4. Separare l'intestino dagli organi interni assicurandosi di mantenere il suo orientamento (dal segmento intestinale anteriore a quello posteriore) e allungarlo. Di solito, il segmento anteriore dell'intestino è più largo del segmento posteriore. Fare attenzione a ottenere tutto l'intestino durante la dissezione.
   nota: L'estremità posteriore è abbastanza fine e fragile nei pesci piccoli e può staccarsi, in particolare negli animali <0,7 g.
5. Arrotolare l'intestino sulla carta da filtro con una pinzetta in modo da staccare il tessuto adesivo dall'intestino.
6. Procedere alla preparazione dell'intestino per le varie analisi a valle

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
MS-222	Sigma Aldrich	E10521	polvere
10x PBS	Sigma Aldrich	P5493
Carta da filtro	Laboratorio di filtri	RM14034252