Generazione di mammosfere primarie: una tecnica per determinare la potenza cellulare

Abstract

Fonte: Lombardo et. al., Saggio di formazione della mammosfera da tessuti e linee cellulari di cancro al seno umano. (2015).

Questo video descrive l'isolamento delle cellule staminali tumorali dalle linee cellulari del cancro al seno. Coltiviamo queste cellule staminali tumorali per generare mammosfere primarie per valutare l'auto-rinnovamento e calcolare l'efficienza di formazione delle sfere, consentendo il confronto tra diverse densità di semina.

Protocollo

1. Generazione di mammosfere primarie da linee cellulari di cancro al seno umano

NOTA: Eseguire i seguenti passaggi sotto una cappa di coltura sterile.

1. Preparare i terreni mammosphere contenenti DMEM/F12 integrati con 2 mM di L-glutammina, 100 U/ml di penicillina, 100 U/ml di streptomicina. Preparare il terreno completo immediatamente prima dell'uso aggiungendo 20 ng/ml di fattore di crescita epidermico umano ricombinante (EGF; Sigma), 10 ng/ml di fattore di crescita dei fibroblasti basici umani ricombinanti (bFGF; R&D Systems) e 1x supplemento B27.
2. Aspirare il terreno dal pallone contenente cellule ad....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
DMEM/F12	Lonza	CC-3151
2 mM di L-glutammina	Sigma Aldrich	G8540
100 U/ml di penicillina e streptomicina	Sigma Aldrich	P4083
20 ng/ml Fattore di crescita epidermico umano ricombinante (EGF)	Sigma Aldrich	E9644
20 ng/ml Fattore di crescita dei fibroblasti basici umani ricombinanti (bFGF)	Sistemi di ricerca e sviluppo	233-FB-025
1x supplemento B27	Invitrogen	Codice 17504-044
Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)	Termo Scientifico	12399902
0,5% tripsina/0,2% EDTA	Sigma Aldrich	Codice: 59418C
Siero fetale di vitello	Primo collegamento Regno Unito	02-00-850
Tripan blu	Sigma Aldrich	Codice 93595
Piastre a 6 pozzetti con attacco basso	Corning	CLS3814