Inflazione dell'agarosio polmonare intero: un metodo per preparare i polmoni per l'imaging dal vivo ex vivo

Abstract

Fonte: Van den Bijgaart R.J.E. et al., Imaging dal vivo ex vivo delle metastasi polmonari e del loro microambiente, J. Vis. Exp. (2016)

Questo video descrive un metodo di preparazione dei polmoni per l'imaging dal vivo ex vivo per studiare le interazioni tra cellule tumorali e cellule stromali, utilizzando l'agarosio per l'inflazione. Nel protocollo del campione, la procedura di inflazione dell'agarosio viene descritta prima di osservare le interazioni cellulari vive.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria di JoVE.

1. Preparazione dei polmoni per l'imaging dal vivo ex vivo

NOTA: Cerca di lavorare il più sterile e attento possibile per evitare inutili sfide alle cellule immunitarie all'interno dei polmoni.

1. Iniettare nel topo per via intraperitoneale (i.p.) un sovradosaggio letale di un anestetico consentito dal protocollo animale approvato da IACUC, ad es. 1 ml di Avertin. Attend....

Risultati

Figura 1. Protocollo per la preparazione dei polmoni per l'imaging dal vivo.(A) Esposizione della trachea dopo la preparazione del topo. (B) Piccola cesoia praticata nella trachea esposta parallelamente agli anelli cartilaginei . (C) Ago da 20 G inserito 4-5 mm nella trachea. (D) Instillazione polmonare di 400 μ

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
anestetico	Na	Na	Anestesia approvata da IACUC, utilizzata per anestesia e/o eutanasia
PBS, USP sterile	Amresco INC	K813-500ML	Grado ultra puro per iniezione endovenosa
1X PBS	Impianto di coltura cellulare UCSF	Na
Piattaforma in polistirolo	Na	Na	Verrà utilizzato come tavola di dissezione
Forbici fini affilate	Strumenti per la scienza	Codice 14060-11
20 g x 1 ago, smusso corto	Bd	305178
forcipe	Negozio di chirurgia Roboz	RS-5135
Siringa da 1 mL senza ago	Bd	309659
Agarosio a bassa temperatura di fusione	Lonza	Codice: 50111	Per ottenere 10 ml di soluzione, pesare 0,2 g di agarosio, aggiungere a 10 ml 1 x PBS e scaldare per sciogliere. L'agarosio si solidifica a temperatura ambiente, quindi si mantiene a bagnomaria a 37 °C fino al momento del gonfiaggio.
RPMI-1640 medio senza rosso fenolo	Tecnologie per la vita	Codice 11835-030
Piastra ai fosfori a 24 pozzetti	E&K scientifico	EK-42892
Vetrini di copertura, 15 mm	Fisher Scientifico	Codice 22-031-144
Regolatore digitale di CO2 e temperatura	Okolab	DGTCO2BX	http://www.oko-lab.com
Camera climatica	Okolab	Na	http://www.oko-lab.com
Microscopio confocale a disco rotante Cell Observer	Zeiss	Na
aria	UCSF	Na
ossigeno	UCSF	Na
diossido di carbonio	UCSF	Na