Consegna intrabronchiale: una tecnica per somministrare selettivamente un agente sperimentale in un polmone di topo

Abstract

Fonte: Liao, S. et. al. Somministrazione intrabronchiale diretta per migliorare la deposizione selettiva dell'agente all'interno del polmone del topo. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video descrive un approccio intrabronchiale per somministrare selettivamente un agente sperimentale nel polmone destro e sinistro distale. Nel protocollo presentato, somministreremo bleomicina per via intrabronchiale in un topo per ottenere un modello migliore per la fibrosi polmonare.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria di JoVE.

1. Approcci non chirurgici di intubazione e somministrazione IB

1. Approccio IB all'incannulamento lobare selettivo del polmone destro distale
   1. Dopo aver eseguito l'incannulamento intratracheale (IT) (utilizzare la mano dominante per intubare il catetere esteso nella trachea attraverso la cavità orale), ruotare la tavola di plastica di +30° (Figura 1A).
   2. Tenere il mozzo del catetere e guidarlo naturalmente parallelamente alla linea mediana del topo, estendendolo a profondità basate sul peso come descritto nella Tabella 1.
      nota: La resistenza a queste profondità dovrebbe essere notata. A questo punto, il topo diventerà leggermente tachipneico, come spiegato nei risultati rappresentativi. Per un operatore esperto, circa il 90% dei tentativi incannulerà con successo il polmone destro (con tachipnea notata).
   3. Erogare 20 μl di colorante blu Evans allo 0,3% (EBD, vedere la tabella dei materiali) con una punta di caricamento in gel.
   4. Erogare 1-2 aliquote (0,1 ml ciascuna) di aria utilizzando il contagocce di vetro.
      nota: Ciò garantisce l'eliminazione della soluzione EBD residua (o degli agenti sperimentali) dall'interno del catetere.
   5. Estrarre il catetere, quindi mantenere la posizione del mouse per 30 s.
   6. Metti l'animale su una coperta riscaldante finché non riprende conoscenza. Il recupero è in genere completo entro 2 minuti.
2. Approccio IB all'incannulamento segmentale selettivo del polmone sinistro distale
   1. Dopo aver eseguito l'incannulamento IT (utilizzare la mano dominante per intubare il catetere esteso nella trachea attraverso la cavità orale), ruotare la tavola di plastica di -74° (Figura 1B).
   2. Tenere il mozzo del catetere e applicare una leggera pressione per far avanzare il catetere nel bronco principale sinistro, esercitando una pressione modesta sia verso il basso (90°) che verso il fermalibri. Alle profondità indicate nella Tabella 1, l'operatore deve notare la resistenza poiché i segmenti inferiori del polmone sinistro sono impegnati. In caso di tachipnea, estrarre il catetere nella posizione di 20-25 mm e riprovare.
   3. Dopo aver incannulato i segmenti polmonari inferiori sinistri, è necessario un cambiamento di posizione per consentire l'assistenza gravitazionale per la somministrazione dell'agente. Ruotare la scheda di plastica di -30° (Figura 1B).
   4. Eroga 40 μl di EBD allo 0,3% con un puntale di caricamento in gel.
      nota: È possibile erogare un volume maggiore di agente perché il polmone sinistro ha un solo lobo.
   5. Erogare 1-2 aliquote (0,1-0,3 ml ciascuna) di aria utilizzando i contagocce di vetro.
      nota: Ciò garantisce l'eliminazione di eventuali EBD residui (o agenti sperimentali) dall'interno del catetere.
   6. Estrarre il catetere, quindi mantenere la posizione del mouse per 30 s.
   7. Metti l'animale su una coperta riscaldante finché non riprende conoscenza. Il recupero è in genere completo entro 2 minuti.

Risultati

Figura 1: Approccio per l'incannulamento e la somministrazione selettiva del polmone lobaro destro/sinistro.(A) Per colpire il polmone destro, la tavola di plastica viene ruotata di +30°, migliorando la facilità di innesto selettivo del bronco principale destro. Il catetere viene fatto avanzare (in base alle distanze proposte nella Tab...

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Catetere IV schermato da 22 G	Bd	381423
Colorante blu Evans	Sigma-Aldrich	E2129
LED-30W Fibra Ottica Doppio Collo D'oca Luci Microscopio Illuminatore	AmScope	LED-30W
Ago Precisionglide, 18G x 1"	Bd	305195	Punta smussata, lunghezza 12 mm