Analisi del ciclo cellulare: un approccio per studiare la regolazione del ciclo cellulare delle cellule tumorali polmonari trasfettate con miRNA

Abstract

Fonte: Hossian, A. K. M. N., et al. Analisi dei trattamenti combinatoriali con miRNA per regolare il ciclo cellulare e l'angiogenesi.J. Vis. Exp.(2019).

miRNA o microRNA sono regolatori chiave della progressione del ciclo cellulare. Questo video descrive un'analisi del ciclo cellulare basata sulla citometria a flusso di cellule tumorali del polmone trasfettate con miRNA, per studiare l'effetto del miRNA sulla regolazione del ciclo cellulare. L'inibizione della proliferazione mediante l'arresto della progressione del ciclo cellulare ha dimostrato di essere un approccio promettente per il trattamento del cancro.

Protocollo

1. Trasfezione miR-143 e miR-506

ATTENZIONE: Usa guanti in lattice, occhiali protettivi e un camice da laboratorio durante l'esecuzione degli esperimenti descritti. Quando necessario, utilizzare la cabina di biosicurezza con la ventola accesa, senza ostruire le vie aeree o disturbare il flusso d'aria laminare. Impostare sempre la finestra di protezione in vetro all'altezza appropriata, come descritto dal produttore.

1. Seminare le cellule NSCLC A549 in un pallone T25 cm²/piastra a 6/96 pozzetti in terreno DMEM/F12K integrato con il 10% di FBS e l'1% di penicillina-streptomicina (terreno di coltura) in un....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
DMEM 4,5 g/L di glucosio, senza piruvato di sodio, con L-glutammina	VWR	VWRL0100-0500
Siero Fetale Bovino - Premium	Biologici di Antlanta	S11150
Siero fetale bovino (FBS)	Fisher Scientifico	10438026
Penicillina-streptomicina 10/10	Biologici di Antlanta	B21210
Ribonucleasi A dal pancreas bovino	sigma	R6513-50MG
Ioduro di Propidio	MP Biochemicals LLC	IC19545825
Etanolo, assoluto (200 proof), grado di biologia molecolare	Fisher BioReagenti	BP2818500
Incubatore a CO2	Termo Scientifico	HERAcell 150i
A549 Cellule di carcinoma polmonare non a piccole cellule	ATCC	ATCC CCL-185
Piastra a 96 pozzetti	CELLTREAT Scientifico	50-607-511
Citometro a flusso FACS Calibur	Becton Dickinson
Thermo Scientific Fiasche trattate per colture cellulari BioLite	Termo Scientifico	12-556-009
Centrifuga a temperatura controllata matchina	Termo Scientifico	ST16R
Matchina per microcentrifuga a temperatura controllata	Eppendrof	5415R
Provette da centrifuga SpectraTube 15ml	VWR	Codice 470224-998
Modfit LT	Software Verity		Passaggio 2.15: Software alternativo per l'analisi delle distribuzioni di popolazione del ciclo cellulare
Provette per microcentrifuga Basix Fisherbrand con tappi a scatto standard	Fisherbrand Basix	02-682-002
has-miR-143-3p miRNA Mimic	Abm	MCH01315
has-miR-506-3p miRNA Mimic	Abm	MCH02824
Miscela di nutrienti F-12K (Kaighn's Mod.) con L-glutammina	Corning	Corning 45000-354
Congelatore negativo 80 °C	VWR	VWR40086A