Microarray di anticorpi: una tecnica per studiare l'espressione proteica delle cellule di cancro del polmone trattate con miRNA

Abstract

Fonte: Hossian, A. et. al. Analisi dei trattamenti combinatori di miRNA per regolare il ciclo cellulare e l'angiogenesi. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video descrive la tecnica per studiare l'espressione proteica nelle cellule di cancro del polmone trasfettate con miRNA utilizzando microarray di anticorpi per misurare l'espressione genica specifica. Nel protocollo presentato, eseguiamo microarray di anticorpi per l'identificazione dell'attività di un trattamento combinatorio con miRNA nell'arresto del ciclo cellulare e dell'angiogenesi.

Protocol

1. Trasfezione miR-143 e miR-506

ATTENZIONE: Usa guanti in lattice, occhiali protettivi e un camice da laboratorio durante l'esecuzione degli esperimenti descritti. Quando necessario, utilizzare la cabina di biosicurezza con la ventola accesa, senza ostruire le vie aeree o disturbare il flusso d'aria laminare. Impostare sempre la finestra di protezione in vetro all'altezza appropriata, come descritto dal produttore.

1. Seminare le cellule NSCLC A549 in un pallone T25 cm²/piastra a 6/96 pozzetti in terreno DMEM/F12K integrato con il 10% di FBS e l'1% di penicillina-streptomicina (terreno di coltura) in un....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
A549 Cellule di carcinoma polmonare non a piccole cellule	ATCC	ATCC CCL-185
Penicillina-streptomicina 10/10	Biologici di Antlanta	B21210
Siero fetale bovino (FBS)	Fisher Scientifico	10438026
Kit di test array di anticorpi, 2 reazioni	Biografia della Luna Piena	KAS02
Array di anticorpi per il ciclo cellulare, 2 vetrini	Biografia della Luna Piena	ACC058
ScanArray Express	PerkinElmer		Passaggio 2.33: Software di analisi dei microarray
Soluzione salina tamponata con fosfato HyClone (PBS)	Fisher Scientifico	SH30256FS
Thermo Scientific Pierce Saggio delle proteine BCA	Termo Scientifico	PI23226