Generazione di un modello murino PDOX del cancro del colon-retto: studio della progressione del cancro del colon-retto in un modello murino

Abstract

Fonte: Moret, R. et al. Modelli di xenotrapianto ortotopico derivati da pazienti per carcinoma a cellule uroteliali umane e cancro colorettale Crescita tumorale e metastasi spontanee. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video descrive il protocollo per la generazione di un modello murino di cancro colorettale xenotrapianto ortotopico derivato da paziente per studiare la progressione delle cellule tumorali del colon-retto in topi diabetici/immunodeficienza combinata grave (NOD/SCID) non obesi. Questo modello murino aiuta a comprendere la crescita del tumore primario e il modello di metastasi.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono gli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria di JoVE.

1. Coltura di linee cellulari

1. Coltivare cellule HK in un terreno RPMI-1640 completo integrato con il 10% di siero fetale bovino, 2 nM di glutammina, 100 U/mL di penicillina G e 100 mg/mL di streptomicina a 37 °C in un incubatore umidificato al 5% di CO₂.
   nota: Le cellule HK sono normali cellule dendritiche follicolari umane e possono essere coltivate ed espanse per ≤ 15 passaggi in vitro.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
RPMI-1640 Medio	Collezione di cultura dei tipi americani	110636
Isoflurano	Henry Schein Salute animale	108333
D-luciferina (150 mg/kg)	Perkin Elmer	122796
glutammina (2 nM)	Fisher Scientifico	35050061
Luc/RFP-lentivirus	Dai nostri collaboratori. Vedi riferimento 13: Gills, J. et al. Un modello di xenotrapianto ortotopico derivato da paziente che consente l'impianto, la crescita, l'angiogenesi e le metastasi del tumore uroteliale umano di alto grado. Oncotarget. 9, 32718-32729, doi:10.18632/ oncotarget.26024 (2018).
penicillina/streptomicina 100 mL (100 U/mL)	Fisher Scientifico	Codice: 15140-122
gas
100% Ossigeno	Airgas Inc	OX USP200
100% CO2	Airgas Inc	CD USPE
topi
Topi NOD/SCID di 6-8 settimane (femmina)	Laboratorio Jackson	Anno 1303
utensileria
Provetta conica da 15 mL	Sarstedt	Codice: 11799
Piatto per coltura tissutale da 150 mm	Stati Uniti d'America Scientific Inc	CC7682-3614
forcipe	Simmetria chirurgica Inc	06-0011
Forbici chirurgiche	Simmetria chirurgica Inc	02--2011
attrezzatura
Incubatrice umidificata al 5% di CO2	Termo Scientifico	Telefono 3110
Macchina di imaging bioluminescente (BLI)	Perkin Elmer	CLS136334
Software per macchine di imaging BLI	Perkin Elmer	CLS136335
Calibro digitale	Strumenti e strumenti Fowler	54-115-330
Microscopio da dissezione	Strumenti di precisione LLC	Numero (504) 228-0076
Camera di induzione dell'isoflurano	Perkin Elmer	119038