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Articolo metodologico

Estrazione di miRNA circolanti: un metodo per isolare i miRNA da campioni di plasma tramite estrazione organica e arricchimento di piccoli RNA

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30 aprile 2023

In questo articolo

Abstract

Fonte: Canale, M. et al., Rilevamento di un pannello personalizzato di microRNA circolante in pazienti con carcinoma colorettale metastatico. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video descrive l'estrazione di microRNA circolanti da campioni di plasma di pazienti con cancro del colon-retto utilizzando l'estrazione organica seguita dall'arricchimento della colonna in fibra di vetro. I miRNA sono stabili nei fluidi biologici come il siero e il plasma, il che li rende biomarcatori circolanti ideali per la diagnosi del cancro, la prognosi e il processo decisionale e il monitoraggio del trattamento. Questo metodo aiuterà a identificare nuovi biomarcatori circolanti in grado di prevedere gli esiti clinici nei pazienti.

Protocollo

NOTA: Eseguire tutti i seguenti passaggi sotto una cappa sterilizzata secondo la Buona Pratica di Laboratorio (GLP).

1. Raccolta e conservazione del plasma

  1. Raccogliere 3 mL di campione di sangue periferico in una provetta K3E EDTA.
  2. Centrifugare la provetta a temperatura ambiente a 1,880 x g per 15 minuti.
  3. Recuperare il plasma surnatante in aliquote di 450 μL.
  4. Conservare i campioni a -80 °C fino al momento dell'uso.
    NOTA: Processare la provetta di sangue periferico entro 2 ore dal prelievo. Durante il recupero del plasma dalla provett....

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Dichiarazioni

Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Provette da 1,5 mL Safe-lock senza RNAsi EppendorfCodice 0030 123.328
Puntali da 1000 μL privi di RNASI Laboratorio stellareS1122-1830
Provette da 2 mL Safe-lock senza RNAsi EppendorfCodice 0030 123.344
Puntali da 20 μL privi di RNASI Laboratorio stellare S1123-1810
Puntali da 200 μL privi di RNASI Laboratorio stellare S1120-8810
mirVana PARIS RNA e kit di purificazione delle proteine native Thermo FisherAM1556
100% etanolo anidro grado ACS Carlo Erba Reagenti414605
2-mercaptoetanolo Sigma-AldrichCodice: M3148
Pipette da laboratorio da 0,2-2, 1-10, 2-20, 20-200, 100-1000 μL
Cappa aspirante
Microcentrifuga da banco
vortice

Tag

Elaborazione di campioni di plasmametodo di estrazione organicafenolo-cloroformio acidoprecipitazione con etanolocentrifugazione con cartuccia filtranteprotocollo di isolamento del miRNAsoluzione denaturante per l'RNArecupero del tampone di eluizione