Infezione segmentaria da adeno-cre: una tecnica per generare un cancro del colon-retto isolato utilizzando modelli murini geneticamente modificati

Abstract

Fonte: Betzler, A. M., et al. Un modello murino geneticamente modificato di cancro del colon-retto sporadico.J. Vis. Exp. (2017).

Questo video descrive la generazione di un modello murino colorettale mediante infezione segmentale da adeno-cre. Il segmento del colon infetto porta alla tumorigenesi all'interno di questo segmento della mucosa, con conseguente progressione degli adenomi in carcinoma invasivo e metastatico. Questo modello è una piattaforma interessante per studi di biologia del cancro e studi terapeutici preclinici.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Induzione Tumorale Locale tramite Infezione Chirurgica da Adeno-Cre

1. Preparazione degli animali per la chirurgia
   nota: Praticamente qualsiasi mutazione condizionale ("floxed") può essere indotta attraverso il metodo qui descritto. Si raccomanda l'uso di mutazioni in geni rilevanti per il cancro del colon-retto, come Apc, Kras o Tp53. L'efficienza della ricombinazione Cre dipende....

Risultati

Figura 1. Immagini colonscopiche dei tumori del colon-retto (alleli condizionali dell'animale dato tra parentesi).
A. Colon distale normale. B. Adenoma precoce 2 settimane dopo l'infezione da adeno-cre. Si noti il colore verde dovuto a un allele reporter GFP in questo topo. (Apc^tm2Rak, Kras^tm4Tyj, Gt(ROSA)26Sor^{tm6(CAG-ZsGree.......}

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Soluzione salina tamponata con fosfato di Dulbecco	Life Technologies GmbH	14190169
Tripsina-EDTA (0,25%, Fenolorosso)	Life Technologies GmbH	25200072
Soluzione salina normale 0,9% (E154)	Serumwerk Bernburg AG	Codice: 10013
Aqua ad injectabilia	B. Braun Melsungen AG	235144
Ad5CMV-Cre (adenovirus, c = 2E +11 PFU/mL)	Nucleo vettoriale di trasferimento genico Università dell'Iowa
Provette da centrifuga da 15 mL, 50 mL	Greiner Bio-One GmbH	188271/227270
Provette Eppendorf 1,5 mL/ 2 mL	Sarstedt AG & Co.	72.695.400
Piastra Petri PS 100/15 mm (sterile, Nuclon)	Fisher Scientific GmbH	10508921/ NUNC150350
Siringa da 1 ml (senza volume morto) - Injekt-F SOLO	Braun/neoLab	194291661
Ago per iniezione 30G	BECTON DICKINSON	Codice 304000
Sevoflurano (Sevoflurano AbbVie)	AbbVie Germany GmbH & Co. KG
Ossigeno medicale	Air Liquide Medical GmbH
Buprenorfina (Temgesic)	Indivior Eu Ltd.
Bepanthen - unguento oftalmico	Bayer Vital GmbH	10047757
Macchina per anestesia da tavolo x / O2 Flush con vaporizzatore di sevoflurano	Parco scientifico	V3000PS/PK
Tamponi di cellulosa	Lohmann & Rauscher Deutschland	Codice: 13356
Siringa da insulina EMG 1 mL (con cannula da 30G)	B. Braun Melsungen AG	Codice 9161627S
Tubi a foro fine (alesaggio: 0,28 mm/ diametro: 0,61 mm)	Smiths Medical Deutschland 8	800/100/100
Pinze Micro-Adson	Strumenti per la scienza	Codice: 11018-12
Forbice dell'iride - ToughCut	Strumenti per la scienza	Codice 14058-11
Porta aghi Olsen-Hegar	Strumenti per la scienza	Codice: 12002-12
Kit AutoClip	Strumenti per la scienza	Codice: 12020-00
PDS Z1012H 6/0 C1 (sutura chirurgica)	Johnson & Johnson Medical GmbH	Z1012H
Morsetto vascolare curvo Micro Serrefine	Strumenti per la scienza	Codice: 18055-05
Clip a molla Fogarty	Edwards	CDSAFE 6
Piastra riscaldante 062	Labotect	Codice: 13854
Isis - Rasoio per capelli	Aesculap - Braun
Fontana di Luce Fredda XENON 175	Karl Storz	Codice 20132101-1	Karl Storz Coloview System Mainz
Cavo luce in fibra ottica	Karl Storz	Codice 69495NL	Karl Storz Coloview System Mainz
Testa della telecamera a tre chip TRICAM	Karl Storz	20221030	Karl Storz Coloview System Mainz
Unità di controllo della telecamera TRICAM SLII	Karl Storz	Codice 20223011-1	Karl Storz Coloview System Mainz
Monitor a schermo piatto da 15" EndoVue	Karl Storz	9415NN	Karl Storz Coloview System Mainz
Telescopio HOPKINS Straight Forward diametro 1,9 mm; lunghezza 10 cm autoclavabile trasmissione della luce in fibra ottica incorporata	Karl Storz	Codice 64301AA
Guaina di protezione ed esplorazione	Karl Storz	Codice 61029C