Articolo metodologico

Microdissezione laser: una tecnica per isolare le cellule tumorali del colon-retto invasive da un modello di coltura organotipica 3D

30 aprile 2023

In questo articolo

Abstract

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Fonte: Bullock M. et al., Profilazione molecolare del microambiente tumorale invasivo in un modello tridimensionale di cellule tumorali del colon-retto e fibroblasti ex vivo. (2014).

Il video descrive la dissezione laser del modello 3D di co-coltura organotipica con precisione a livello di micron. Nei modelli organotipici 3D, i costituenti stromali come i fibroblasti sono co-coltivati tridimensionalmente con cellule epiteliali tumorali. Il modello 3D funge da strumento sperimentale che consente di studiare l'invasione e le interazioni cancro-stroma in condizioni quasi fisiologiche.

Protocollo

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1. Preparazione organotipica:

Preparazione del gel organotipico impregnato di fibroblasti:

  1. Preparare una sospensione di cellule fibroblastiche contenente 5 x 105 cellule per organotipico in DMEM integrata con il 10% di FCS e 292 μg/ml di L-Glutammina.
  2. Preparare i gel organotipici con ghiaccio nelle seguenti proporzioni:
    • • 7 volumi di Rat-Tail Collagen: Matrigel mix (1:1)
    • • 1 volume di DMEM filtrato 10x
    • • 1 volume di FCS
    • • 1 volume di sospensione cellulare di fibroblasti contenente 5 x 105 fibroblasti
      Per 9 gel (1 ml per gel), pr....

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Dichiarazioni

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Nessun conflitto di interessi dichiarato.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Linee cellulari di cancro del colon-retto - esempio mostrato SW480ATCCATCC CCL-228
collageneBD Bioscienze354265
MatrigelBD Bioscienze354234
Membrana in nylonMerck MilliporeVVLP01300
Griglia metallicaL'azienda MeshWSS20-A4themeshcompany.com
Piattaforma di microdissezione laserLeica MicrosystemsLeica AS LMD
Guide a membranaDispositivi molecolari
Cresyl VioletMerck Millipore1052350025

Ristampe e permessi

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Tag

Coltura organotipica 3DSezionamento dei tessutiInclusione in paraffinaColorazione con cresyl violettoProtocollo di microdissezioneFronte di invasione tumoraleTampone di lisi cellulareVetrini con membrana

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