Saggio di citometria da trazione: un metodo per quantificare la forza di trazione esercitata dalle cellule tumorali sulla ECM

Abstract

Fonte: Ali, M. Y., et al. Isolamento di cellule tumorali primarie del colon umano da tessuti chirurgici e loro coltura direttamente su substrati elastici morbidi per citometria da trazione. J. Vis. Exp. (2015).

Questo video descrive il test di microscopia della forza di trazione. Il test determina la trazione cellulare delle cellule tumorali del colon umano sulla matrice extracellulare presente su idrogel elastico morbido con perle fluorescenti incorporate. Lo spostamento risultante delle perle fluorescenti viene misurato utilizzando un software appropriato.

Protocol

1. Saggio di microscopia della forza di trazione

1. Scaldare la soluzione 0,25% tripsina-EDTA/10% SDS a 37 °C in bagnomaria per 10 minuti prima dell'inizio degli esperimenti di trazione.
2. Rimuovere un gel (funzionalizzare i gel PA e il vetro con molecole ECM, fibronectina umana a una concentrazione di 50 μg/ml) dall'incubatore per colture cellulari alla volta e posizionarlo sul tavolino fluorescente del microscopio invertito (ingrandimento 32X).
3. Trova una singola cella nel campo visivo. Rimuovere il coperchio della capsula di Petri.
4. Scattare un'immagine a contrasto di fase della cella (ad esempio,

Results

Figura 1. Coltura primaria di cellule di colon umano di successo (sia cancerogena che normale) su diversi gel rigidi e su piastra di polistirene. Le immagini a contrasto di fase mostrano la morfologia tipica di (A) cellule tumorali e (B) cellule normali su diversi substrati di rigidità.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Pbs	Lonza	17-516F
tripsina	Worthington	LS003736
acrilamide	Sigma-Aldrich	Codice: A4058
N-metilenbisacrilammide (bis)	Sigma-Aldrich	Visualizzazione del materiale M1533
Fibronectina umana	BD bioscienze	354008
Perle fluorescenti da 0,1 μm	Tecnologie di vita	F8801
0,25% tripsina-EDTA	Tecnologie di vita	Codice 25200-056
vetrini in vetro da 12 mm2	Corning	Codice 2865-12