Pseudofracture, un modello riproducibile murino di sterili traumi muscolo-scheletrici, permette per la valutazione di fine periodo risposta immunitaria post-traumatico. Questo articolo descrive l'esecuzione procedurale del modello passo dopo passo, compresa la possibilità di combinazioni modello sperimentale di permesso di studio di traumi multipli.
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Articolo metodologico
Pseudofracture: Una periferica acuta Modello Trauma Tissue
In questo articolo
Sommario
Abstract
A seguito di un trauma è uno dei primi iper-reattiva risposta infiammatoria che può portare a disfunzione d'organo multipla e alta mortalità nei pazienti con trauma, questa risposta è spesso accompagnata da una immunosoppressione ritardato che aggiunge le complicazioni cliniche di infezione e può anche aumentare la mortalità 1-9. Molti studi hanno cominciato a valutare questi cambiamenti nella reattività del sistema immunitario dopo un trauma. 10-15
Gli studi immunologici sono fortemente sostenute attraverso la grande varietà di transgenici e topi knockout per la modellazione in vivo;. Aiuto di questi ceppi nelle indagini dettagliate per valutare i meccanismi molecolari coinvolti nella risposta immunologica 16-21
La sfida di modellazione trauma sperimentale murino è un'indagine a lungo termine, come le tecniche di fissazione della frattura nei topi, può essere complesso e non facilmente riproducibili. 22-30
Questo modello pseudofracture, un modello di trauma facilmente riproducibili, supera queste difficoltà, immunologicamente mimando un ambiente frattura degli arti, consentendo libertà di movimento per gli animali e la sopravvivenza a lungo termine senza il continuo, l'uso prolungato di anestesia. L'intento è quello di ricreare le caratteristiche delle fratture delle ossa lunghe; muscoli feriti e dei tessuti molli sono esposti a osso danneggiato e midollo osseo senza rompere l'osso nativo.
Il modello pseudofracture compone di due parti: un accordo bilaterale di lesione da schiacciamento muscolare alla arti posteriori, seguito da iniezione di una soluzione di osso in questi muscoli feriti. La soluzione osso è preparata dalla raccolta delle ossa lunghe da entrambe le zampe posteriori di età e peso corrispondenti donatore singenici. Queste ossa vengono poi pigiate e risospesi in tampone fosfato per creare la soluzione di osso.
Frattura del femore bilaterale è un modello di uso comune e consolidata di traumi degli arti, ed è stato il modello comparativo durante lo sviluppo del modello pseudofracture. Tra le varietà di modelli di frattura a disposizione, abbiamo scelto di utilizzare un metodo chiusa di frattura con lesione dei tessuti molli come il nostro confronto al pseudofracture, come volevamo una sterile ancora proporzionalmente grave trauma dei tessuti periferici modello. 31
Shock emorragico è un reperto comune nel contesto di gravi traumi, e l'ipoperfusione globale aggiunge un elemento molto rilevante per un modello di trauma. Pseudofracture 32-36 Il modello può essere facilmente abbinato ad un modello di shock emorragico per un modello di traumi multipli di gravità elevata 37.
Protocollo
1. Strumento e preparazione del campo chirurgico:
Tutte le procedure sperimentali sono eseguite utilizzando tecniche asettiche. Prima di iniziare, l'area sperimentale deve essere accuratamente puliti e sterilizzati. Il banco deve essere disinfettati, lasciati asciugare all'aria e poi pulito con alcool al 70%. Posizionare un tampone chirurgico blu e il campo sterile spogliatoio nell'area di lavoro sperimentale.
Tutti i materiali e gli strumenti sono sterilizzati in autoclave prima dell'uso. Siringhe e aghi sterili vengono ricevuti. Il ricercatore deve essere opportunamente vestito di camice, masch....
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Discussione
Pseudofracture, un modello riproducibile murino di sterili traumi muscolo-scheletrici, permette per la valutazione della risposta immunitaria post-traumatico. Il modello simula pseudofracture immunologicamente un ambiente frattura degli arti attraverso la ricreazione delle caratteristiche di una frattura delle ossa lunghe: muscoli feriti e dei tessuti molli sono esposti a danni alle ossa e midollo osseo, senza rompere l'osso nativo 38,39 bifasica Una risposta immunitaria può essere visto di seguito. traum.......
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Dichiarazioni
Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida e regolamenti stabiliti dalla cura degli animali e del Comitato Istituzionale Usa e il comportamento di ricerca e Compliance Office dell'Università di Pittsburgh, un AALAS / AAALAC ente accreditato. Origine animale comprendono Jackson Laboratori e Charles Rivers Laboratories. Tutti gli animali sottoposti a garanzia estesa salute attraverso ogni fornitore così come l'Università di Pittsburgh programmi interni di polizia sanitaria di monitoraggio. Questa ricerca è condotta in conformità con i principi del governo degli Stati Uniti per l'utilizzo di animali vertebrati. Il programma viene registrato presso l'USDA, e ha una lettera di garanzia con l'Ufficio Public Health Service del benessere degli animali da laboratorio.
Ringraziamenti
Fonte di finanziamento / Numero Biologia molecolare dello shock emorragico GM053789
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Telo chirurgico blu | Fisher Scientific | 50-7105 | |
| Medicazioni sterili per campo operatorio | Fisher Scientific | NC9517505 | |
| Piastra riscaldante circolante 18"x26" | Harvard Apparatus | py872-5272 | |
| Sterilizzatore a perle calde per strumenti | VWR international | 11156-002 | |
| Vassoio in acciaio inossidabile 8" x 11" | VWR international | 62687-049 | |
| Lastre di plexiglass (10x15x0,5 cm) | Officina meccanica dell'Università di Pittsburgh | ||
| Rotoli di nastro 1" | Corporate Express | MMM26001 | |
| tubo conico da 50 cc | Qualsiasi fornitore | ||
| Barattoli a bocca larga con pareti dritte (utilizzati come cappuccio per il cono nasale) | VWR international | 159000-058 | |
| Oster A5 con lama numero 40 | VWR international | 10749-020 | |
| Forbici chirurgiche (dritte – 12 cm | Fine Science Tools | 14068-12 | |
| Pinze emostatiche curve -18 cm | Harvard Apparatus | 81331718 | |
| Pinze (punta da 0,8 mm, curve, 10 cm) | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Garza 4"x4" | Qualsiasi fornitore | ||
| tubo microcentrifuga da 1,5 cc | Qualsiasi fornitore | ||
| Secchiello per ghiaccio | Qualsiasi fornitore | ||
| Mortaio e pestello | Fisher Scientific | 12-961AA | |
| siringa da 1 cc con ago da 25G | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| ago da 20G | Qualsiasi fornitore | ||
| pipetta da 1 mL | Qualsiasi fornitore | ||
| Punte per pipetta da 1 mL | Qualsiasi fornitore | ||
| Tubi Falcon in polistirene da 8 ml | VWR international | 60819-331 | |
| Sacchetto per sterilizzazione 3"x8" | VWR international | 24008 | |
| Sacchetto per sterilizzazione 5"x10" | VWR international | 24010 | |
| Piastra di Agar MacConkey II | BD Biosciences | 221172 | |
| Alcol etilico - 200 proof | Pharmco-AAPER | [70%] | |
| Pentobarbital Sodico (Soluzione di Nembutal Sodico) | OVATION Pharmaceuticals | 70 mg/kg | |
| Aerrane (Isoflurano) | Baxter Internationl Inc. | 99.9% | |
| Triadina iodopovidonica (Betadine) | Triad monouso | ||
| Soluzione salina tamponata al fosfato (PBS) | |||
| Cloridrato di buprenorfina | Bedford Laboratories | 0,1 mg/kg |
Riferimenti
- DeCamp, M. M., Demling, R. H. Posttraumatic multisystem organ failure. JAMA. 260, 530-534 (1988).
- Deitch, E. A. Multiple organ failure. Pathophysiology and potential future therapy. Ann Surg. 216, 117-134 (1992).
- Carrico, C. J., Meakins, J. L., Marshall, J. C.
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Ristampe e permessi
