Questo protocollo descrive l'isolamento e la dissociazione del tessuto medulloblastoma mouse e allotrapianto successive delle cellule tumorali in topi immunocompromessi destinatario al fine di avviare medulloblastoma secondario.
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Articolo metodologico
Intracranica allotrapianto ortotopico di cellule di medulloblastoma in topi immunocompromessi
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il medulloblastoma è il tumore più comune pediatrici del sistema nervoso. Una grande quantità di studi sugli animali si è concentrata sui precursori neuronali dei granuli del cervelletto (CGNPs) come la cellula di origine per il medulloblastoma 1-4. Tuttavia, le diverse presentazioni cliniche dei sottotipi medulloblastoma nei pazienti umani (nodulare, desmoplastico, classica e grandi cellule / anaplastico), e il fatto che il medulloblastoma si trova in un sottogruppo di pazienti umani senza espressione ectopica di CGNP marcatore 5, suggeriscono che la origini cellulare e molecolare di medulloblastoma sono più complessi e lungi dall'essere completamente decifrato. Pertanto, è essenziale per determinare se vi è un tumore medulloblastoma alternativa di cellule di origine sulla base di quale tipo cellulare specifico modalità terapeutica può essere sviluppato. A tal fine, ortotopico intracranica allotrapianto di organismi geneticamente segnato tipi di cellule tumorali seguita da successive analisi secondaria di sviluppo del tumore nei pazienti consentirà di determinare l'origine cellulare delle cellule tumorali iniziare. Qui descriviamo il protocollo sperimentale per ortotopico intracranica allotrapianto di cellule derivate da medulloblastoma primario tessuto tumorale, e questa procedura può essere utilizzata anche per il trapianto di cellule provenienti da linee cellulari stabilizzate.
Protocollo
1. Micro-dissezione del tumore-cuscinetto cervelletto e dissociazione del tessuto tumorale
- Recupero del tessuto tumorale
- Topi malati cuscinetto medulloblastoma sono spesso runted e visualizzare idrocefalo e tipici sintomi neurologici, tra cui paralisi posteriore e l'incapacità di riacquistare la postura in caso di ribaltamento. Per recuperare tessuto tumorale, eutanasia topi per inalazione di anidride carbonica. E 'troppo importante per noi non eseguire dislocazione cervicale, una procedura che genera una pressione al cranio posteriore e può compromettere l'integrità del tessuto tumorale.
- Decapitazione viene ....
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Discussione
Diversi fattori critici di successo per garantire la cellula medulloblastoma allotrapianto che la formazione di tumori rendimenti secondarie sono le seguenti: in primo luogo, utilizzare solo Accutase 50% per il tessuto dissociazione e non oltre il digest del tessuto come trattamento enzimatico prolungata porta ad una significativa riduzione della vitalità delle cellule. Anche utilizzare solo il Pipetman taglia 1 ml più piccole punte può anche generare danni fisici alle cellule dissociate. E 'bene avere una miscela d.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Questo studio è stato supportato anche da finanziamenti della Vanderbilt-Ingram Cancer Center Support Grant (P30 CA068485), il Brain Tumor Foundation Infanzia e il National Institutes of Health (NS042205).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Mezzo Neurobasal | Invitrogen | 21103049 | |
| hEGF | Invitrogen | PHG0311 | 25ng/ml |
| bFGF | Invitrogen | PHG0023 | 25ng/ml |
| N2 | Invitrogen | 17502048 | 1X |
| B27(-RA) | Invitrogen | 12587010 | 1X |
| Accutase | Invitrogen | A1110501 | 50% |
| Glutammina | Invitrogen | 25030081 | 2mM |
| Strumento stereotassico | Stoelting Co. | 51730 | |
| Trapano a flessibile Foredom, modello con supporto sospeso | Stoelting Co. | 58650 | |
| Portaprobe grande | Stoelting Co. | 51633 | |
| Siringa da 10 μL, 26 ga., con punta smussata | Stoelting Co. | 51105 | |
| Punta da trapano da 0,75 mm | Stoelting Co. | 51455-3 |
Riferimenti
- Schuller, U. Acquisition of granule neuron precursor identity is a critical determinant of progenitor cell competence to form Shh-induced medulloblastoma. Cancer Cell. 14, 123-134 (2008).
- Yang, Z. J.
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Ristampe e permessi
