In questo protocollo, dimostriamo la realizzazione di una serie di messaggi microattuatore verticalmente sfollati su cui si basa la tecnologia, e come questa tecnologia di base può essere modificato per condurre high-throughput di coltura cellulare meccanicamente dinamica sia la cultura bidimensionale e tridimensionale paradigmi.
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Articolo metodologico
Piattaforme microfabbricazione per coltura cellulare meccanicamente dinamica
In questo articolo
Sommario
Abstract
La capacità di sondare sistematicamente in risposta cellulare in vitro a combinazioni di stimoli mechanobiological per l'ingegneria tissutale, la scoperta di farmaci o fondamentali studi di biologia cellulare è limitata dalle tecnologie attuali bioreattore, che non può allo stesso tempo applicare una varietà di stimoli meccanici di cellule in coltura. Per affrontare questo problema, abbiamo sviluppato una serie di piattaforme di microfabbricazione progettato per schermo per gli effetti degli stimoli meccanici in un formato high-throughput. In questo protocollo, dimostriamo la realizzazione di una serie di messaggi microattuatore verticalmente sfollati su cui si basa la tecnologia, e illustra, inoltre, come questa tecnologia di base può essere modificata per condurre high-throughput di coltura cellulare dinamica meccanicamente in entrambe le due dimensioni e tre paradigmi cultura dimensionale.
Protocollo
A. Descrizione del dispositivo e il funzionamento
I dispositivi sono fabbricati con multistrato litografia soft 1 in polidimetilsilossano (PDMS), e sono in grado di generare simultaneamente una serie di condizioni meccaniche in singoli luoghi di coltura cellulare attraverso l'array microfabbricazione. In questo protocollo, i passaggi per fabbricare una vasta gamma di azionamento pneumatico-microposts sono descritta per la prima, seguita dalla procedura per modificare il dispositivo per consentire la cultura meccanicamente dinamica sia bidimensionali (2D) e tridimensionali (3D) paradigmi della cultura. L'approccio delineato microf....
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Discussione
Anche se concettualmente semplice, fabbricazione del dispositivo ci vuole una certa abilità sperimentale e pratica. In particolare nel caso di colture cellulari in 2D, l'allineamento degli strati multipli nel dispositivo può essere impegnativo, soprattutto in una grande area array. In pratica, possiamo ottenere un affidabile al 100% tasso di successo allineamento utilizzando dispositivi con 50 micron di tolleranza nella spaziatura tra le funzioni adiacenti in strati multipli. Abbiamo anche dimostrato con successo l&.......
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Dichiarazioni
Nessun conflitto di interessi dichiarati.
Ringraziamenti
Noi riconosciamo il sostegno finanziario della scienze naturali e ingegneria Research Council del Canada e del Canadian Institutes of Health Research (CHRPJ 323533-06), la borsa di studio Ontario Graduate programma a CM, ei presidenti canadese Research in Micro e Nano Sistemi Ingegneria di YS, e in Mechanobiology al CAS.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Kit monomero e crosslinker PDMS Sylgard 184 | Dow Corning | ||
| Stampi SU-8 | |||
| Agente di silanizzazione: (tridecafluoro-1,1,2,2-tetraidroottile)-1-triclorosilano | United Chemical Technologies | ||
| Cuscinetti in schiuma | Negozi di articoli per hobbistica, spessore 1-2 mm | ||
| Trasparenze per stampanti a getto d'inchiostro ad uso superiore | Grand Toy | ||
| Piastre in plexiglass | |||
| Morsetto a C | Negozio di ferramenta | ||
| Sistema di micromanipolazione | Siskiyou, Inc. | ||
| Piastra di vuoto su misura | |||
| Sistema di visione, zoom Navitar 12x | Navitar | ||
| Tubi di collegamento | VWR international | Clay Adam Intramedic PE190 | |
| Aghi smussati 18G | Small Parts (www.smallparts.com) | ||
| Micropompa a diaframma eccentrica | Schwarzer Precision | SP 500 EC-LC4.5V DC | |
| Valvole solenoidi | Pneumadyne | S10MM-30-12-3 | |
| Collettore per valvole solenoidi | Pneumadyne | MSV10-1 | |
| Generatore di funzioni | |||
| 3-(trimetossilisilil) propil metacrilato | Sigma-Aldrich | ||
| Diacrilato di polietilene glicole 3,4 kDa | Laysan Bio Inc. | ||
| Polietilene glicole 8 kDa | Sigma-Aldrich | ||
| Irgacure 2959 | Ciba Specialty Chemicals | ||
| 1-vinil-2-pirrolidinone | Sigma-Aldrich | ||
| Reagenti standard per colture cellulari |
Riferimenti
- Unger, M. A., Chou, H. P., Thorsen, T., Scherer, A., Quake, S. R. Monolithic microfabricated valves and pumps by multilayer soft lithography. Science. 288, 113-116 (2000).
- Schaffer, J. L. Device for the application of a dynamic biaxia....
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Ristampe e permessi
