Valutazione delle interazioni batteri-cellule ospiti utilizzando le perle biomimetiche

Abstract

Fonte: Stones, D. H., et al. Materiali biomimetici per caratterizzare le interazioni batterio-ospite. J. Vis. Exp. (2015)

Questo video dimostra l'uso di perle batteriomimetiche per quantificare l'adesione batterica alle cellule epiteliali dell'ospite in condizioni competitive. Descrive le fasi coinvolte nel trattamento delle cellule, nella loro lisizzazione e nella piastrata delle diluizioni seriali per misurare le unità formanti colonie.

Protocollo

1. Misurazione dell'adesione batterica
   1. Ai punti temporali indicati (ad esempio, 1 ora dopo l'infezione), rimuovere il terreno dallo strato cellulare.
   2. Lavare accuratamente lo strato cellulare con soluzione salina sterile e preriscaldata tamponata con fosfato (PBS) (almeno 3-4 lavaggi da 1 ml di PBS ciascuno) per rimuovere eventuali cellule non attaccate.
   3. Lisi le cellule ospiti aggiungendo 1 ml di una soluzione sterile di Triton X-100 all'1 % v/v in PBS per pozzetto. Incubare la piastra a 37 °C per 5 minuti.
   4. Pipettare più volte ogni campione su e giù prima di trasferire il contenuto di ciascun pozzetto....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Reagents
Perle di polistirene modificate con carbossilato	Sigma	CLB9	dannoso; è disponibile
una gamma di dimensioni e colori alternativi delle particelleDulbecco's Modified Eagle's Medium - high glucose - Con 4500 mg/L di glucosio e bicarbonato di sodio, senza L-glutammina, piruvato di sodio e rosso fenolo, liquido, filtrato sterile, adatto per colture cellulari	Sigma	D1145	per esperimenti di infezione
DMEM	Sigma	D6429	per il mantenimento di cellule ospiti
in coltura Siero fetale bovino, inattivato a caldo	Sigma	F9665	integratore per terreno di coltura tissutale
Penicillina-streptomicina -Soluzione stabilizzata, con 10.000 unità di penicillina e 10 mg di streptomicina/mL, filtrato sterile, BioReagente, adatto per colture cellulari	Sigma	F9665	integratore per terreno di coltura tissutale
PBS	Sigma	D8537
Plasticware
Piastre a 24 pozzetti	Greiner	662160
Apparecchiature
Impianti
Pipetta

per la coltura dei tessutimulticanale