Separazione dei batteri in base alla quantità di capsula utilizzando un gradiente di densità discontinuo

Abstract

Fonte: Feltwell, T., et.al. Separazione dei batteri in base alla quantità di capsula utilizzando un gradiente di densità discontinuo. J. Vis. Exp. (2019)

Questo video mostra l'uso di un gradiente di densità discontinuo per separare i ceppi batterici in base alla quantità di capsule. Centrifugando una libreria di mutanti trasposoni attraverso il gradiente, i batteri con diverse densità di capsule si localizzano in strati distinti. Le frazioni separate possono quindi essere raccolte per l'analisi a valle.

Protocol

1. Aggiunta di cellule preparate ai gradienti e separazione per centrifugazione

1. Aggiungere 600 μl di cellule preparate alla parte superiore del gradiente nella provetta molto lentamente e senza mescolare l'interfaccia.
2. Posizionare le provette negli adattatori per provette e pesare gli adattatori e le provette combinate per assicurarsi che siano bilanciati.
   1. Posiziona gli adattatori delle provette in un rotore ad angolo fisso all'interno di una centrifuga da banco. Centrifugare per 30 min a 3.000 x g.
   2. Dopo la centrifugazione, rimuovere con cura le provette, posizionarle in una rastrelliera adatta e f....

Materials