Questo video mostra un metodo basato sulla coltura per identificare le specie di Vibrio , evidenziando l'agar cromogenico come un'alternativa più accurata all'agar comunemente usato tiosolfato-citrato-sali biliari-saccarosio o TCBS. L'agar cromogenico fornisce una differenziazione superiore dei ceppi di Vibrio rilevando le attività enzimatiche specie-specifiche.
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Articolo metodologico
Un nuovo mezzo cromogenico per la rilevazione rapida delle specie di vibrioni
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26 settembre 2025
In questo articolo
Abstract
Protocollo
Crescita su mezzi selettivi e differenziali
- Da due a quattro giorni prima dell'esperimento, strisciare tutti i ceppi microbici su un terreno non selettivo (TSAS, BHI o agar cioccolato) per l'isolamento della colonia. Incubare le piastre a 35-37 °C per 48 ore. Controlla la purezza delle colture osservando la morfologia delle colonie dopo l'incubazione. Le colture pure dovrebbero produrre colonie che mostrano una morfologia simile.
- Trasferire alcune colonie isolate in 5 ml di brodo. Incubare le provette a 35-37 °C per 16-24 ore.
NOTA: Usa colonie giovani, che hanno meno di quattro giorni, per preparare colture notturne in tutti gli esperimenti.
- Striare un ciclo di colture notturne su terreni selettivi e differenziali (TCBS e agar cromogenico) per l'isolamento delle colonie. Incubare le piastre a 35-37 °C per un massimo di 96 ore.
- Registra la crescita complessiva di tutti i ceppi esaminando sia la densità di coltura sulla piastra che le dimensioni delle colonie isolate. Registra il colore delle colonie sotto la luce ambientale e/o UV. Si notino altre caratteristiche della colonia isolata, come l'elevazione, il margine e la forma.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Reagente/Attrezzatura | |||
| Agar | Fisher Scientifico | DF0140-15-4 | può utilizzare altre marche |
| BHI in polvere | Fisher Scientifico | DF0418-17-7 | può utilizzare altre marche |
| Generatore di gas CampyGen | Diagnostica Hardy | CN035A | fornire un'atmosfera microaerofila; può utilizzare altre marche |
| Piastre di agar al cioccolato | Diagnostica Hardy | E14 | può utilizzare altre marche |
| Provette per coltura | Fisher Scientifico | S50712 | può utilizzare altre marche |
| Piastre di agar HardyChrom Vibrio | Diagnostica Hardy | G319 | Questo studio valuta questo mezzo |
| Incubatrice | Qualunque | ||
| Anse di inoculazione | Fisher Scientifico | 22-363-606 | In questo studio è stato utilizzato un microlitro da 10 microlitri |
| Petri | Fisher Scientifico | FB0875713 | può utilizzare altre marche |
| Pipetta e puntali | Eventuali punte sterilizzate | ||
| TCBS in polvere | Diagnostica Hardy | 265020 | Questo studio valuta questo mezzo |
| TSB in polvere | Fisher Scientifico | DF0370-07-5 | può utilizzare altre marche |
| Cabina di visualizzazione UV | Qualunque | Emette luce UV a onde lunghe | |
| Bagnomaria | Qualunque | ||
| Specie e ceppi batterici | |||
| Aeromonas hydrophila | ATCC | ||
| Candida albicans | ATCC | ||
| Campylobacter jejuni | ATCC | ||
| Escherichia coli | ATCC | ||
| Proteus mirabilis | ATCC | ||
| Pseudomonas aeruginosa | ATCC | ||
| Stafilococco aureo | ATCC | ||
| Salmonella Choleraesuis | ATCC | ||
| Shigella boydii | ATCC | ||
| Shigella flexneri | ATCC | ||
| Shigella sonnei | ATCC | ||
| Vibrio alginolyticus | ATCC | ||
| V. cholerae (i sierotipi includono O139, O1, non O1, El Tor biovars) | FDA, ATCC | ||
| V. damigella | FDA | ||
| V. fisheri | Ambiente | ||
| V. fluvialis | CDC | ||
| V. furnissii | CDC | ||
| V. hollisae | FDA | ||
| V. metschnikovii | ATCC | ||
| V. mimicus | FDA | ||
| V. parahaemolyticus (i sierotipi includono O3:K6, O1:K56, O4:K8, O5:K15, O8, ecc.) | ATCC, FDA, CDC, Ambiente | ||
| V. proteolyticus | FDA | ||
| V. vulnificus | FDA |
