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Isolamento mirato di colonie batteriche mediante degradazione dell'idrogel con pattern di luce

September 26th, 2025

In This Article

Abstract

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Fonte: Fattahi, N., et al. Interfacce idrogel fotodegradabili per lo screening, la selezione e l'isolamento dei batteri. J. Vis. Exp. (2021).

Questo video mostra l'estrazione di colonie batteriche da un idrogel fotodegradabile utilizzando la luce UV. Viene selezionata una colonia specifica e viene progettata un'esposizione alla luce modellata per avviare la degradazione localizzata dell'idrogel. Dopo aver regolato l'intensità e la durata della luce, viene applicata la luce UV, rilasciando la colonia. La colonia viene quindi aspirata attraverso un tubo e trasferita in un tubo per l'analisi a valle.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Ceppi batterici e protocolli di coltura

  1. Striature di colonie di batteri su piastre di agar integrate con mezzi di crescita appropriati. In questo rapporto, B. subtilis (ceppo 1A1135, Bacillus Genetic Stock Center) è coltivato su ATGN (0,079 M KH2PO4 (fosfato monobasico di potassio), 0,015 M (NH4)2SO4 (solfato di ammonio), 0,6 mM MgSO4·7H2O (solfato di magnesio eptaidrato), 0,06 mM CaCl2·2H2O (cloruro di calcio diidrato), 0,0071 mM MnSO4·H2O (solfato di manganese (II) monoidrato), 0,125 M FeSO4·7H2O (solfato fe....

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Results

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figure-results-1

Figura 1: Formazione di idrogel su vetrini in vetro tiolato. (A) I distanziatori con uno spessore di 12,7 μm sono posizionati su due lati opposti di un vetrino coprioggetti di base contenente gruppi tiolici reattivi. (B) La soluzione precurs.......

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
(3-mercaptopropil)trietossisilanoSigma-AldrichCodice 175617-25G> 95%
Detersivo in polvere AlconoxAlconox1104 
Solfato di ammonioFisher ChemicalA702-500Certificato ACS Granulare
Autoclave SK300CYamato Scientific18016 
Bacillus subtilis 1A1135Centro di Stock Genetico BacillusCodice 1A1135 
Microscopio verticale in campo chiaroSocietà OlimpoBX51 
Cloruro di calcio anidroFisher ChemicalC614-500per essiccatori pellet, 4-20 mesh
Centrifuga 5702Eppendorf5702 
Acido citrico monoidratoSigma-AldrichC1909-500GReagente ACS, > 99,0%
D-glucosio (destrosio)VWR Amresco Life Science0188-1KG 
Base in elastomero siliconico DOWSIL 184Dow Silicones Corporation Temperatura di stoccaggio: -30-60 °C
DOWSIL 184 Agente indurente in elastomero siliconicoDow Silicones Corporation Temperatura di stoccaggio: < 32 C
Spettrofotometro per micropiastre EPOCH2Strumenti BioTekEPOCA2 
Escherichia coli Codice ATCC 25922Thermo Fisher ScientificoR19020 
Etanolo anidroFisher Chemical459844 
Fisherbrand vetro di copertura del microscopioFisher ScientificoCodice 12540A 
Vetrini per microscopio premium Fisherfinest lisciFisher Scientifico12-544-4 
Soluzione di perossido di idrogenoSigma-Aldrich216763-500MLContiene inibitore, 30% in peso di H2O
Incu-Shaker MiniBenchmarkE5-0014-01 
IsopropanoloSigma-Aldrich190764 
Solfato di magnesio, 7-idratoMacron Chimica Fine6066-04Materiali ad alte prestazioni Avantor, Inc.
MetanoloSigma-AldrichCodice 179337-4LReagente ACS, > 99,8%
Spettrofotometro NanoDrop OneTermo ScientificoND-ONEC-W 
Azoto compressoMathesonUN1066 
Pulitore al plasma di ossigenoHarrick PlasmaPDC-001-HP 
Pentaeritritolo tetra(mercaptoetil) poliossietilene (4 bracci-PEG)NOF America CorporationPTE-100SHSunbright-PTE-100SH
Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS), 10XVWR Amresco Life ScienceK813-500MLConservare a una temperatura compresa tra 15 °C e 30 °C
Polidimetilsilossano (PDMS) Slygard 184Dow Corning4019862 
Poligono400MightexDSI-D-000 
Vetrini per microscopio di alta qualitàFisher Scientifico12-544-425 x 75 x 1 mm
Cloruro di sodioSigma Scienze della VitaCodice S5886-500GBioreagente, adatto per colture cellulari
Idrossido di sodioSigma-AldrichS8045-500GBioXtra, > 98%, pellet (anidro)
Sodio fosfato monobasico diidratoSigma-Aldrich71505-250GBioUltra, per biologia molecolare, > 99,0% (T)
Misuratore di spessore in acciaio inoxProdotti a marchio Precision77739 
Acido solforicoSigma-Aldrich320501-2.5L 
Toluene, anidro, 99,8%Sigma-AldrichCodice 244511-1LAnidro, > 99,8%
Tricloro (1H,1H,2H,2H perfluoroottil) silano (TPS), 97%Sigma-AldrichNumero 448931-10G 
Brodo di soia tripticoSigma-Aldrich22092-500GPer microbiologia
Sonicatore ad ultrasuoniFischer ScientificFS-110H 

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Photodegradable HydrogelBacterial Colony IsolationLight Patterned DegradationUV Light ExposureFluorescence MicroscopyColony AspirationHydrogel DegradationTargeted Colony ExtractionLight Pattern DesignSyringe Aspiration

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