Crescita batterica su un chip microfluidico per studiare la resistenza ai farmaci antibiotici

Abstract

Fonte: Liu, P. C., et al. Progettazione e utilizzo di un morbidostat automatizzato a basso costo per l'evoluzione adattativa dei batteri nella selezione di farmaci antibiotici. J. Vis. Exp. (2016)

Questo video mostra l'uso di un chip microfluidico per visualizzare e confrontare la crescita e la morfologia di ceppi di E. coli wild-type e resistenti al trimetoprim sotto stress antibiotico trimetoprim.

Protocollo

1. Esperimento di crescita su chip

1. Prima di caricarlo nel dispositivo microfluidico, sciacquarlo con acqua deionizzata per 1 ora e mezzo M9 per 1 ora.
2. Scongelare il campione congelato giornalmente a temperatura ambiente per 5 minuti e inoculare una nuova provetta con terreno M9 fresco. Porre il campione in un incubatore agitatore a 37 °C per una notte.
3. Diluire il campione microbico di 10 volte con terreno M9 e caricarlo nel dispositivo microfluidico premendo il contenitore del campione microbico a 5 psi. Quindi caricare il terreno del farmaco trimetoprim (TMP) nel chip premendo il contenitore del terreno del farmaco a 5 psi. Eseguire la miscelazione tra il micro....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Microscopio invertito	Leica Microsystems	Leica DMI-LED	utilizzato per la misurazione microfluidica Utilizzare l'obiettivo X40 NA=0,55
Incubatore per microscopio	Strumento per cellule vive	CU-109	Utilizzato per la misurazione microfluidica
Valvole solenoidali	Pneumadyne	S10MM-31-12-3	Normalmente aperto 1,3 Watt 12 Vdc
Scheda di interfaccia USB	Ingegneria per hobby	Modulo I/O digitale USBIO24-R	per misura microfluidica
Compressore d'aria	Rocker Scientifico	GIROCOLLO 440	Sorgente di pressione per microfluidcs Pressione massima 80 Psi
Raccordi luer-lock maschio a 1/8"	ValuePlastics.com	MTLL230-1	Utilizzato per il controllo microfluidico
Attacco filettato da 1/8" a attacco filettato 10-32	ValuePlastics.com	B-1	Utilizzato per il controllo microfluidico
Raccordi luer-lock femmina su attacco filettato 10-32	ValuePlastics.com	KFTL-1	Utilizzato per il controllo microfluidico
Transistor darlington NPN 500mA, 40V (2N6427)	DigiKey.com	2N6427GOS-ND	Utilizzato per il controllo microfluidico
10kOhm, resistore a film di carbonio, 0,25W	DigiKey.com	P10KBACT-ND	Utilizzato per il controllo microfluidico
Condensatore al tantalio, 10uF, 25V, 10%	DigiKey.com	478-1841-ND	Utilizzato per il controllo microfluidico
Telecamera CCD Andor	Andor	Zyla 4.2 Plus SCMOS	Utilizzato per l'imaging microfluidico su chip
Trimetoprim	Sigma
Difco M9 sale minimo 5x	BD		Medio