Isolamento di batteri resistenti agli antibiotici da un campione d'acqua per l'analisi molecolare

Abstract

Fonte: Ghadigaonkar, D. e Rath, A. Isolamento e identificazione di batteri resistenti agli antibiotici presenti nell'acqua e caratterizzazione molecolare dei loro geni di resistenza agli antibiotici. J. Vis. Exp. (2023)

Questo video mostra l'isolamento e la preparazione di batteri resistenti agli antibiotici da un campione d'acqua utilizzando terreni selettivi. Il DNA viene estratto da batteri resistenti agli antibiotici e amplificato per identificare i geni batterici resistenti agli antibiotici.

Protocollo

1. Raccolta ed elaborazione dei campioni

1. Raccolta campioni
   1. Raccogliere il volume appropriato del campione d'acqua in contenitori sterili, assicurandosi che non siano riempiti più di 3/4 del contenitore.
   2. Trasportare i campioni in laboratorio in condizioni asettiche il prima possibile dopo la raccolta e processarli immediatamente.
2. Elaborazione dei campioni
   1. Filtrare asetticamente il campione d'acqua attraverso un panno di mussola sterile per rimuovere eventuali particelle.
   2. Effettuare le opportune diluizioni seriali dell'acqua filtrata per ulteriori ana....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
2x PCR Taq mastermix	HiMedia	MBT061-50R	Per la preparazione di miscele di reazione PCR
Incubatore a 37 °C	GS-192, Gayatri Scientific	NA	Per l'incubazione di batteri
Autoclave	Equitrone	NA	Necessario per la sterilizzazione di terreni, lastre di vetro, provette, ecc.
Armadio Bisafety B2	SET	IMSET BSC-Classe II Tipo B2	Utilizzato per lavori microbiologici come la coltura batterica, AST ecc.
Cefotaxima antibiotico in polvere	HiMedia	TC352-5G	Per la preparazione della soluzione madre antibiotica necessaria durante l'isolamento di batteri resistenti agli antibiotici
Centrifuga minispin	Eppendorf	Minispin Plus-5453	Utilizzato per pellettare i detriti durante la preparazione del DNA grezzo
Ciprofloxacina antibiotica in polvere	HiMedia	TC447-5G	Per la preparazione della soluzione madre antibiotica necessaria durante l'isolamento di batteri resistenti agli antibiotici
Colorimetro	Ricerca	NA	Per il controllo dell'OD delle sospensioni di coltura
Incubatore con agitatore di raffreddamento	BTL41 Allied Scientific	NA	Per l'incubazione di piastre di terreno per la coltura di batteri
Antibiotico eritromicina in polvere	HiMedia	CMS528-1G	Per la preparazione della soluzione madre antibiotica necessaria durante l'isolamento di batteri resistenti agli antibiotici
Antibiotico eritromicina in polvere	HiMedia	TC024-5G	Per la preparazione della soluzione madre antibiotica necessaria durante l'isolamento di batteri resistenti agli antibiotici
Antibiotico in polvere di kanamicina	HiMedia	MB105-5G	Per la preparazione della soluzione madre antibiotica necessaria durante l'isolamento di batteri resistenti agli antibiotici
Brodo Luria Bertani	Himedia	Codice: M1245-500G	Per l'arricchimento delle culture
R2A Agar, modificato	HiMedia	Visualizzazione del materiale M1743	Per la preparazione di piastre per l'isolamento della carica batterica totale e resistente agli antibiotici (AR)
Cloruro di sodio	HiMedia	TC046-500G	Per la preparazione di soluzione fisiologica allo 0,85% per la diluizione in serie del campione d'acqua
Staphylococcus aureus subsp. aureus ATCC 29213	HiMedia	Codice 0365P	Utilizzato come controllo durante l'esecuzione di AST
Antibiotico in polvere di vancomicina	HiMedia	CMS217	Per la preparazione della soluzione madre antibiotica necessaria durante l'isolamento di batteri resistenti agli antibiotici
Bilancia di pesatura	Mettler Toledo	ME204 Mettler Toledo	Utilizzato per pesare polveri di fluidi, polveri reagenti, ecc.