Coltura unicellulare di batteri all'interno di vescicole giganti

Abstract

Fonte: Morita, M., et al. Coltura cellulare batterica a livello di singola cellula all'interno di vescicole giganti. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video mostra un metodo per la coltura e l'osservazione di singole cellule batteriche incapsulate all'interno di vescicole giganti ancorate a un doppio strato lipidico supportato. Il sistema consente l'imaging stabile e a lungo termine delle dinamiche di crescita di singole cellule in un microambiente confinato e fisiologicamente rilevante.

Protocollo

1. Preparazione di un sistema di osservazione della vescicola gigante (GV) (Bacterial Cell Culture System)

1. Preparazione di piccole vescicole (SV) per la costruzione di una membrana a doppio strato supportata
   1. Versare 20 μl della soluzione di POPC (1-palmitoil-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine) e 4 μl della soluzione di biotina-PEG-DSPE (1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfoetanolammina-N-[biotinyl(polyethyleneglycol)-2000) in una provetta di vetro.
   2. Evaporare il solvente organico mediante flusso d'aria per formare un film lipidico e porre questo campione in un essiccatore per 1 ora per far evaporare ....

Risultati

Figura 1: Il sistema di osservazione della coltura cellulare batterica all'interno dei GV. (a) I GV sono immobilizzati su una membrana supportata attraverso il legame biotina-neutravidina sul vetro di copertura. I GV sono in.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Bactotriptone	BD Bioscienze	211705
Cloroformio	Wako Pure Chemicals	032-21921
Vetro di copertura (18 × 18 mm)	Matsunami Glass Ind.	C018181	spessore 0,13–0,17 mm
Vetro di copertura (30 × 40 mm)	Matsunami Glass Ind.	ordine personalizzato	spessore 0,25–0,35 mm
Centrifuga da tavolo	Hi-Tech Co.	ATT101	tipo di rotore oscillante
Guarnizione bifacciale (10 × 10 × 1 mm)	Nitoms	T4613
Glucosio	Wako Pure Chemicals	049-31165
Microscopio invertito	Olimpo	IX-73
Metanolo	Wako Pure Chemicals	133-16771
Sistema di riscaldamento microscopico	COLPO DI TOKAI	TP-110R-100
Olio minerale	Nacalai Tesque	23334-85
Neutravidina	Thermo Fisher Scientifico	31000
Obiettivo	Olimpo	LUCPLFLN 40×/0,6 NA
Membrane in policarbonato	Avanti Polar Lipids	610005
Fotocamera sCMOS	Andor	Zyla 4.2 plus	Dimensione dei pori 100 nm
Cloruro di sodio	Wako Pure Chemicals	191-01665
Saccarosio	Wako Pure Chemicals	196-00015
Bagno ad ultrasuoni	COME UNO	ASU-3D
Estratto di lievito	BD Bioscienze	212750
Provetta in plastica con coperchio da 0,6 mL	Watson	130-806C
Provetta in plastica con coperchio da 1,5 mL	Sumitomo bachelite Co.	MS4265-M
1-palmitoil-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphocoline	Avanti Polar Lipids	Codice 850457P
1,2-distearoil-sngliccero-3-fosfoetanolammina-N-[biotinil(polietilenglicole)-2000]	Avanti Polar Lipids	880129P	POPC
			Biotina-PEG-DSPE