Un test a base liquida multipozzetto per lo screening di abbattimenti di C. elegans

Abstract

Fonte: Anderson, Q. L. et al. Un patosistema C . elegans ad alto rendimento, ad alto contenuto e a base liquida. J. Vis. Exp. (2018)

Questo video mostra un metodo di screening ad alto rendimento che utilizza Caenorhabditis elegans per studiare i knockdown genici durante le interazioni ospite-patogeno. Descrive la procedura per preparare i vermi knockdown e trasferirli su piastre di saggio per valutare gli effetti dell'uccisione dei vermi indotta da agenti patogeni.

Protocol

1. Adattamento per lo screening di ceppi multipli di Caenorhabditis elegans o knockdown (configurazione dello screening dell'interferenza dell'acido ribonucleico (RNAi))

Nota: Questo è uno screening RNAi descritto per una configurazione di piastra a 24 pozzetti.

1. Aggiungere 1 mL di S Basal per pozzetto di una piastra a 24 pozzetti contenente vermi seminati con RNAi. Agitare delicatamente i vermi agitando la piastra, quindi trasferirli in una piastra vuota e sterile a 24 pozzetti. Lasciare che i vermi si stabiliscano gravitazionalmente (~5 minuti).
2. Aspirare il surnatante, lasciando circa 1 mL. Aggiungere 7 mL di S Basal in ogni pozzetto.
3. Ripetere i passaggi 1.1 - 1.2 almeno altre 2 volte. Dopo il lavaggio finale, aspirare il surnatante, lasciando circa 400 μl.
4. Utilizzando la funzione Ricampionatore del selezionatore di viti senza fine, selezionare 22 vermi dalla sospensione di viti senza fine della piastra a 24 pozzetti in ciascun pozzetto di una piastra a 384 pozzetti (ogni pozzetto di una piastra a 24 pozzetti produce 8 - 12 pozzetti di una piastra a 384 pozzetti).
   1. Per evitare la fame, pipettare i batteri in piastre a 384 pozzetti (un ceppo che funge esclusivamente da cibo, come OP50, o un ceppo patogeno) prima della cernita.
5. Dopo che i vermi sono stati smistati nella piastra a 384 pozzetti, aggiungere piccole molecole o altri materiali specifici per l'esperimento.

Materials