Un test a base liquida multipozzetto per lo screening di abbattimenti di C. elegans

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fonte: Anderson, Q. L. et al. Un patosistema C . elegans ad alto rendimento, ad alto contenuto e a base liquida. J. Vis. Exp. (2018)

Questo video mostra un metodo di screening ad alto rendimento che utilizza Caenorhabditis elegans per studiare i knockdown genici durante le interazioni ospite-patogeno. Descrive la procedura per preparare i vermi knockdown e trasferirli su piastre di saggio per valutare gli effetti dell'uccisione dei vermi indotta da agenti patogeni.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Adattamento per lo screening di ceppi multipli di Caenorhabditis elegans o knockdown (configurazione dello screening dell'interferenza dell'acido ribonucleico (RNAi))

Nota: Questo è uno screening RNAi descritto per una configurazione di piastra a 24 pozzetti.

Aggiungere 1 mL di S Basal per pozzetto di una piastra a 24 pozzetti contenente vermi seminati con RNAi. Agitare delicatamente i vermi agitando la piastra, quindi trasferirli in una piastra vuota e sterile a 24 pozzetti. Lasciare che i vermi si stabiliscano gravitazionalmente (~5 minuti).
Aspirare il surnatante, lasciando circa 1 mL....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number	Comments
COPAS FP BioSorter	Unione Biometrica		Citometro a flusso per oggetti di grandi dimensioni/selezionatore di viti
24 Blocco RB a pozzetti profondi	Thermo Fisher Scientifico	CS15124
Piastra a 384 pozzetti	Greiner Bio-One	Codice prodotto: 781091
Terreni di crescita dei nematodi (NGM)			Quantità per litro: 18 grammi di agar, 3 grammi di NaCl, 2,5 grammi di peptone, 1 ml di cloruro di calcio (1 M), 1 ml di solfato di magnesio (1 M), 25 ml di tampone fosfato e 973 ml di acqua milli-Q
S Basale			Quantità per litro: 5,85 grammi di NaCl, 6 grammi di fosfato di potassio monobasico, 1 grammo di fosfato di potassio bibasico e 1 litro di acqua milli-Q
Agar	Scienze della Vita Iologiche USB	Codice A0930
NaCl	Scienze della Vita Iologiche USB	S5000
Peptone	Scienze della Vita Iologiche USB	P3300
Cloruro di calcio	Scienze della Vita Iologiche USB
Solfato di magnesio	Fisher Scientifico	Visualizzazione del materiale M63-500
Tampone fosfato			Quantità per litro: 132 mL di fosfato di potassio bibasico (1M) e 868 mL di fosfato di potassio monobasico (1M)
Fosfato di potassio monobasico	Acros Organics	7778-77-0
Fosfato di potassio bibasico	Scienze della Vita Iologiche USB	P5100
Ceppi batterici
P. aeruginosa (PA14)
Superfood E. coli (OP50)
Batteri che esprimono l'RNAi di E. coli (HT115)
Ceppo di vermi
glp-4(bn2) (Beanan e Strome, 1992, PMID: 1289064)

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission