Visualizzazione della motilità batterica utilizzando un terreno semisolido integrato con colorante redox

Abstract

Fonte: Chu, W. e Zhuang, X. Visualizzazione della motilità batterica basata su una reazione cromatica. J. Vis. Exp. (2022)

Questo video mostra un saggio di agar semisolido basato su colorante redox per valutare la motilità batterica distinguendo visivamente i ceppi mobili e non mobili.

Protocollo

Ceppi batterici

NOTA: Ottanta ceppi sono stati isolati dall'ambiente acquatico e identificati utilizzando uno strumento automatizzato di identificazione dei batteri (vedi Tabella dei materiali), tra cui Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Vibrio spp., Klebsiella pneumoniae e Aeromonas hydrophila (Tabella 1). Lo Staphylococcus aureus (vedi la Tabella dei Materiali) è stato utilizzato come controllo negativo non mobile; Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella typhimurium (vedi la Tabella dei materiali) sono stati utilizzati come ceppi di controllo positivo.

1. Identificare i ceppi batterici di prova da utilizzare per l'analisi della motilità.
2. Includere i controlli non mobili negativi e i ceppi di controllo positivi mobili.

Osservazione della motilità batterica potenziata da TTC

1. Prelevare singole colonie di batteri in esame da piastre di agar e inocularle nel terreno semisolido con TTC (2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro) perforandole con aghi da inoculazione.
2. Coltivare le provette a 37 °C nell'incubatore per 24-48 ore per osservare i risultati.
3. Osservare lo stato di crescita: caratterizzare i batteri come non mobili (-) se solo la linea di puntura è rossa. Caratterizzare i batteri come mobili (+) se il colore rosso si diffonde leggermente verso l'esterno lungo la linea di puntura.

Tabella 1: Confronto della motilità batterica.

Sforzo		Terreno semisolido con agar allo 0,4%		Terreno semisolido con 0,4% di agar e 0,005% TTC
		24 h	48 h	24 h	48 h
P. aeruginosa ATCC27853		+	+	+	+
Coli ATCC25922		+	+	+	+
S. typhimurium ATCC14028		+	+	+	+
S. aureus ATCC25923		-	-	-	-
E. coli (15)		12	14	13	14
Salmonella spp. (8)		7	8	8	8
A. hydrophila (20)		18	20	20	20
Vibrio spp. (8)		7	8	8	8
P. aeruginosa (24)		18	20	22	23
K. pneumoniae (5)		-5	-5	-5	-5
I numeri indicano il numero di ceppi positivi (+) e di colorazioni negative (-).

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Bacto Agar	Difco
Escherichia coli	ATCC	ATCC25922	Controllo positivo
Pseudomonas aeruginosa	ATCC	ATCC27853	Controllo positivo
Stafilococco aureo	ATCC	ATCC25923	Controllo non mobile negativo
Triptosio	OSSOIDE
TTC (cloruro di 2,3,5-trifenil-tetrazolio)	Sigma	298-96-4
Sistema automatizzato di identificazione microbica VITEK 2	Bio Mérieux