Questo video mostra un saggio di agar semisolido basato su colorante redox per valutare la motilità batterica distinguendo visivamente i ceppi mobili e non mobili.
NOTA: Ottanta ceppi sono stati isolati dall'ambiente acquatico e identificati utilizzando uno strumento automatizzato di identificazione dei batteri (vedi Tabella dei materiali), tra cui Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Vibrio spp., Klebsiella pneumoniae e Aeromonas hydrophila (Tabella 1). Lo Staphylococcus aureus (vedi la Tabella dei Materiali) è stato utilizzato come controllo negativo non mobile; Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella typhimurium (vedi la Tabella dei materiali) sono stati utilizzati come ceppi di controllo positivo.
Identificare i ceppi batterici di prova da utilizzare per l'analisi della motilità.
Includere i controlli non mobili negativi e i ceppi di controllo positivi mobili.
Osservazione della motilità batterica potenziata da TTC
Prelevare singole colonie di batteri in esame da piastre di agar e inocularle nel terreno semisolido con TTC (2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro) perforandole con aghi da inoculazione.
Coltivare le provette a 37 °C nell'incubatore per 24-48 ore per osservare i risultati.
Osservare lo stato di crescita: caratterizzare i batteri come non mobili (-) se solo la linea di puntura è rossa. Caratterizzare i batteri come mobili (+) se il colore rosso si diffonde leggermente verso l'esterno lungo la linea di puntura.
Tabella 1: Confronto della motilità batterica.
Sforzo
Terreno semisolido con agar allo 0,4%
Terreno semisolido con 0,4% di agar e 0,005% TTC
24 h
48 h
24 h
48 h
P. aeruginosa ATCC27853
+
+
+
+
Coli ATCC25922
+
+
+
+
S. typhimurium ATCC14028
+
+
+
+
S. aureus ATCC25923
-
-
-
-
E. coli (15)
12
14
13
14
Salmonella spp. (8)
7
8
8
8
A. hydrophila (20)
18
20
20
20
Vibrio spp. (8)
7
8
8
8
P. aeruginosa (24)
18
20
22
23
K. pneumoniae (5)
-5
-5
-5
-5
I numeri indicano il numero di ceppi positivi (+) e di colorazioni negative (-).
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Materials
List of materials used in this article
Name
Company
Catalog Number
Comments
Bacto Agar
Difco
Escherichia coli
ATCC
ATCC25922
Controllo positivo
Pseudomonas aeruginosa
ATCC
ATCC27853
Controllo positivo
Stafilococco aureo
ATCC
ATCC25923
Controllo non mobile negativo
Triptosio
OSSOIDE
TTC (cloruro di 2,3,5-trifenil-tetrazolio)
Sigma
298-96-4
Sistema automatizzato di identificazione microbica VITEK 2
Bio Mérieux
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