Patterning microfluidico e tracciamento basato sulla fluorescenza della crescita batterica di singole cellule

Abstract

Fonte: Pioli, R., et al., Patterning di microrganismi e microparticelle attraverso l'assemblaggio sequenziale assistito da capillarità. J. Vis. Exp. (2021)

Questo video mostra il metodo di cattura di singole cellule di Escherichia coli (E. coli) marcate in fluorescenza in trappole microfluidiche utilizzando una sospensione priva di carbonio e un flusso controllato, seguito dall'aggiunta di nutrienti per innescare la crescita e l'imaging a fluorescenza delle microcolonie.

Protocol

1. Disegno batterico

1. Un giorno prima dell'esperimento, far crescere una popolazione di Escherichia coli (ceppo MG1655 prpsM-GFP). Inoculare la coltura direttamente dal brodo congelato e farla crescere per una notte per 20 ore in brodo di lisogenia (LB) in un incubatore a 37 °C. Aggiungere 50 μg/mL di kanamicina affinché le cellule mantengano il plasmide prpsM-GFP (proteina fluorescente verde).
2. Il giorno dell'esperimento, impostare l'incubatrice a scatola (Figura 1A) a 37 °C diverse ore prima dell'esperimento per garantire una temperatura uniforme e stabile prima di iniziare. Quindi, posizionare la pompa a siringa e la lastra di v....

Results

Figura 1: Schema della piattaforma per l'assemblaggio sequenziale assistito da capillarità in un canale microfluidico. (A) Incubatrice a scatola. L'incubatore a scatola mantiene una temperatura uniforme e costante (in questo caso, 30 °C) all.......

Materials