Visualizzazione delle interazioni batteriche a singola cellula

Abstract

Fonte: Yarringto, K. D., et al. Visualizzazione cinetica delle interazioni batteriche interspecie a singola cellula. J. Vis. Exp. (2020)

Questo video mostra la preparazione di un sistema di cocoltura utilizzando batteri mobili e non mobili sotto un tampone di agarosio per l'imaging di cellule vive. Mostra come i batteri mobili rilevano attrattivi chimici e invadono le colonie non mobili, rivelando interazioni batteriche.

Protocollo

1. Preparazione delle cellule batteriche e tamponi di inoculazione

1. Misurare la densità ottica, OD₆₀₀, di ciascuna sottocoltura e diluire Pseudomonas aeruginosa a_{OD 600} = 0,03 e Staphylococcus aureus a_{OD 600} = 0,10 in M8T (Minimum Medium 8 + triptone) preriscaldato a 37 °C. Mescolare P. aeruginosa e S. aureus in un rapporto 1:1 e vortex.
   NOTA: Se i ceppi richiedono antibiotici, possono essere aggiunti alla notte e alla sottocoltura, ma non devono essere aggiunti quando si mescolano le specie per l'imaging se influenzano le altre specie nella cocoltura. La stabilità del plasmide e ....

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Cuscinetti di agarosio
Piatto inferiore in vetro da 35 mm con micropozzetto da 20 mm con vetro di copertura da 1,5	Cellvis	D35-20-1.5-N	Uno per stampi per tamponi di agarosio, uno per esperimenti
Spatole tonde-coniche	VWR	82027-530
Isolatore in silicone, press-to-seal, 1 pozzetto, diametro 2.0 mm, 20 mm, silicone/adesivo	Sigma-Aldrich	S6685-25EA	Per stampi per tamponi di agarosio
Pinzetta	VWR	89259-944
M8T Supporti minimi
D (+) Glucosio	RPI	G32045
KH₂PO₄	RPI	P250500
MgSO₄	Sigma-Aldrich	208094
NaCl	RPI	S23025
Na₂HPO₄·7H₂O	Sigma-Aldrich	230391
Triptone	BD Bioscienze	DF0123173
Ceppi batterici
Pseudomonas aeruginosa PA14 (WT) pSMC21 (Ptac-GFP)	PMID: 9361441
Stafilococco aureo USA300 LAC (WT)	PMID: 23404398		USA300 CA-Meticillina ceppo resistente LAC senza plasmidi