Questo video mostra la coltura e la preparazione di Salmonella typhimurium per ottenere una sospensione batterica pulita, metabolicamente attiva e adatta all'uso sperimentale.
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Articolo metodologico
Preparazione della coltura di Salmonella typhimurium
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30 ottobre 2025
In questo articolo
Abstract
Protocollo
Tutte le fasi che prevedono l'uso di Salmonella typhimurium patogena devono essere eseguite in una struttura di livello biologico BSL-2 (livello di biosicurezza 2) o superiore.
1. Coltura di Salmonella typhimurium
- Inoculare la Salmonella typhimurium (ceppo SL1344) da una singola colonia batterica in 5 ml di brodo di infuso cardiaco cerebrale (BHI) utilizzando un ansa batterica.
- Incubare la sospensione batterica in un incubatore a 37 °C per una notte con agitazione.
- Il giorno seguente, trasferire 1 mL di sospensione batterica in 19 mL di brodo BHI in un pallone conico e incubare a 37 °C in un incubatore con agitazione.
- Monitorare la crescita di S. typhimurium misurando la densità ottica (OD) a 600 nm (OD600) con uno spettrofotometro. Le misurazioni devono essere effettuate ogni 30 minuti circa.
- Quando OD600 raggiunge 1,0, rimuovere la sospensione batterica dall'incubatore e trasferirla in una provetta da 50 mL. Centrifugare i batteri a 5.400 x g per 15 minuti a 4 °C.
- Rimuovere il surnatante e risospendere in 10 mL di soluzione salina sterile tamponata con fosfato (PBS).
- Centrifugare a 5.400 x g per 15 min a 4 °C.
- Rimuovere il surnatante e risospendere i batteri in 4,9 ml di PBS sterile.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| MgCl₂ | Carl Roth | A537.4 | |
| Saccarosio | Carl Roth | 4621.1 | |
| Mannitolo | Carl Roth | 4175.1 | |
| Spettrofotometro SmartSpec 3000 | Bio-Rad | 170-2501 | |
| Ansa batterica (10μl) | Sarstedt | 86.1562.010 | |
| Sierotipo di Salmonella enterica Typhimurium SL1344 | Istituto Leibniz DSMZ-Collezione tedesca di microrganismi e colture cellulari | ||
| PBS (soluzione salina tamponata con fosfato) | Biochrom | L1825 |
