Preparazione della coltura di Streptococcus mitis per studi di interazione ospite-patogeno

Abstract

Fonte: Naji, A., et al. Studio dello stress ossidativo causato dagli streptococchi del gruppo Mitis in Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019).

Questo video mostra il metodo per la coltura di Streptococcus mitis in condizioni microaerofile utilizzando l'estratto di lievito Todd-Hewitt, o terreno di agar THY, per preparare colture batteriche per studi di interazione ospite-patogeno.

Protocollo

1. Preparazione degli streptococchi del gruppo Mitis per l'infezione

1. Strisciare i ceppi desiderati di streptococchi sull'agar THY (Todd-Hewitt Yeast Extract) da 100 mm x 15 mm (se le piastre sono state conservate a 4 °C, preriscaldare le piastre a 37 °C prima di striare i rispettivi ceppi), quindi incubare le piastre a 37 °C durante la notte (~18 h) in un barattolo di candele che fornisce un ambiente microaerofilo per la crescita degli streptococchi (le piastre striate possono essere conservate per una settimana a 4 ° C).
2. Per propagare gli isolati clinici degli streptococchi, utilizzare l'agar trittico di sangue di soia. Incubare le piastre a 37 °C in un barattolo di candele per una notte (~18 h).
3. Il giorno successivo, rimuovi i piatti dal barattolo di candele e raccogli le colonie isolate usando un anello sterile. Inoculare 15 mL di provette coniche sterili contenenti 2 mL di brodo THY. Per propagare isolati clinici di streptococchi, integrare il brodo THY con il 5% v/v di sangue di pecora. Chiudere bene i tappi e incubare le provette a 37 °C in condizioni statiche.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
BD Bacto Todd Hewitt Brodo	Fisher Scientifico	DF0492-17-6
Estratto di lievito	Fisher Scientifico	BP1422-500
Pipette sierologiche monouso in polistirene 10 mL	Fisher Scientifico	07-200-574
Pipette sierologiche monouso in polistirene 25 mL	Fisher Scientifico	07-200-575
Piastre di Petri batteriologiche Falcon con coperchio (35 mm x 10 mm)	Fisher Scientifico	08-757-100A
Piastra Petri con coperchio trasparente (60 mm x 15 mm)	Fisher Scientifico	FB0875713A
Piastre Petri con coperchio trasparente (100 mm x 15 mm)	Fisher Scientifico	FB0875712
S. mitis Codice ATCC 49456
Agar