Esecuzione della somministrazione batterica intratracheale in un modello murino

Abstract

Fonte: Venuprasad, K., et al. Somministrazione intratracheale di Haemophilus influenzae in modelli murini per studiare l'infiammazione delle vie aeree. J. Vis. Exp. (2016)

Questo video mostra la somministrazione intratracheale di un inoculo batterico patogeno polmonare in un topo anestetizzato per modellare l'infezione del tratto respiratorio inferiore.

Protocollo

Tutte le procedure che coinvolgono modelli animali sono state esaminate dal comitato istituzionale locale per la cura degli animali e dal comitato di revisione veterinaria JoVE.

1. Instillazione intratracheale (i.t.)

1. Iniettare nel topo per via intraperitoneale (i.p.) 0,1 mL/10 g di peso corporeo di topo con una soluzione di ketamina 150 mg/ml + 20 mg/ml di xilazina. La procedura deve essere eseguita nel cappuccio con una fonte di luce per mantenere l'animale al caldo.
2. Pizzicare lo spazio interdigitale del mouse per verificare che il mouse sia adeguatamente anestetizzato.
3. Posiziona il mouse sul retro. Radere la zona ventrale del collo e disinfettare con clorexidina e alcol etilico al 70%.
4. Sollevare la pelle della parte ventrale superiore del collo usando una pinza per denti di ratto. Praticare una piccola incisione (0,5-1,0 cm) sopra il timo usando un bisturi e sezionare accuratamente il muscolo per esporre la trachea.
   1. Utilizzando una siringa da 1 ml con un ago da 27 G, iniettare lentamente 0,05 ml di aria, seguita da 0,05 ml di Haemophilus influenzae non tipizzabile (NTHi) o soluzione fisiologica come controllo, seguita da altri 0,05 ml di aria. Mantieni l'animale in posizione verticale per circa 1 minuto.
5. Chiudere l'incisione con colla chirurgica. Tenere il mouse sdraiato lateralmente e caldo per circa 10 minuti.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Soluzione rapida e abile	Sigma	GS500-500ML
Ago per siringa 20/26 G	BD	REF305115/175
Siringa da 1 ml	BD	RIFERIMENTO 309602
Forbici da dissezione, diritte, lunghe 10 cm	Kentscientifico	INS600393
Pinze a iride, seghettate, lunghe 10 cm	Kentscientifico	INS650915
Pinzetta 5 in acciaio inox, lunghezza 11 cm	Kentscientifico	INS600095