Estrazione e purificazione di plastoglobuli da batteri fotosintetici

Abstract

Fonte: Shivaiah, K., et al. Isolamento di goccioline lipidiche di plastoglobulo da tessuto fogliare vegetale e cianobatteri. J. Vis. Exp. (2022)

Il video dimostra l'isolamento dei plastoglobuli dai cianobatteri. Inizia con una coltura di cianobatteri e procede attraverso la disgregazione cellulare utilizzando la forza meccanica. Il rilascio di pigmenti fotosintetici indica il successo della lisi. Un gradiente di gradino del saccarosio viene quindi utilizzato per separare i componenti cellulari in base alla densità, consentendo ai plastoglobuli a bassa densità di formare una banda distinta nella parte superiore. Questa frazione viene raccolta e conservata per ulteriori analisi.

Protocollo

1. Isolamento di plastoglobuli grezzi

1. Estrazione di plastoglobuli grezzi da cianobatteri
   1. Coltivare una coltura da 50 mL di Synechocystis sp. PCC 6803 fino alla fase stazionaria (circa 7-10 giorni) e regolare la densità cellulare a una densità ottica a 750 nm (OD₇₅₀) di 2,0 utilizzando uno spettrofotometro. Per le condizioni di coltura, utilizzare terreni BG-11 e coltivare in un incubatore a un'intensità luminosa di 150 μmol di fotoni/m²/s, 2% CO₂, 32 °C e con agitazione continua a 150 giri al minuto (rpm).
   2. Per rimuovere i polisaccaridi, lavare le cellule centrifugando la col....

Risultati

Figura 1: Isolamento e immunoblotting di plastoglobuli e tilacoidi. (A) Un campione rappresentativo di plastoglobulo purificato da Z. mays prima dell'estrazione dal gradiente di saccarosio. (B) Un cam.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Ascorbato	BDH	BDH9242
Albumina sierica bovina	Proliant Biologico	68700
Cella a pressione francese (modello FA-079)	SLM/Aminco	N/A
HEPES	Sigma Aldrich	H3375
Cloruro di magnesio	Sigma Aldrich	Codice: M8266
Incubatore ad agitazione Multitron	Infors HT	N/A
Idrossido di potassio	Prodotti chimici Fisher	Codice: M16050
Cisteina ridotta	MP Biochemicals	101444
Sorbitolo	Sigma Aldrich	S3889
Saccarosio	Sigma Aldrich	S9378
Synechocystis sp. PCC 6803	N/A	N/A
Ultracentrifuga Optima MAX-TL	Beckman Coulter	Codice A95761