Motilità di scorrimento nei filamenti di Phormidium lacuna

Abstract

Fonte: Weber, N., et al., Trasformazione naturale, espressione proteica e crioconservazione del cianobatterio filamentoso Phormidium lacuna. J. Vis. Exp. (2022)

Questo video mostra la procedura per valutare la motilità di scorrimento in Phormidium lacuna omogeneizzando le colture di filamenti per creare una sospensione uniforme, preparando un test su piastra di Petri su un vetrino da microscopio e visualizzando il movimento del filamento.

Protocollo

1. Saggio per il movimento in mezzo liquido
   1. Per l'osservazione diretta della motilità, trasferire 8 mL di terreno contenente P. lacuna in una piastra di Petri di 6 cm. Attendere qualche minuto fino a quando il campione raggiunge la temperatura ambiente, quindi coprire la capsula di Petri con un foglio di cellophane.
   2. Posizionare un vetrino da microscopio sul tavolo x-y di un microscopio standard con fotocamera. Accendere la luce del microscopio. Idealmente, utilizzare sempre le stesse impostazioni elettriche e ottiche per l'illuminazione. Sposta un obiettivo 4x o 10x nel percorso della luce.
   3. Posizionare la capsula di Petri sopra il vetrino. Regolare i singoli filamenti o i fasci di filamenti in base ai movimenti x, y e z della tabella.
      NOTA: A causa della disposizione tridimensionale, solo una parte della sezione pertinente può essere messa a fuoco. La lamina di cellophane consente di regolare la messa a fuoco senza restrizioni.
   4. Osservare i movimenti di singoli filamenti o fasci. Assicurarsi che la lente dell'obiettivo non tocchi il liquido. Registra i movimenti dei filamenti con una normale fotocamera per microscopio.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Vetreria diversa
Microscopio DM750	Zeiss
Telecamera oculare MikrOkular Full HD	Bresser		per registrazioni time-lapse, accoppiato al minicomputer Raspberry Pi
Piastre di Petri polistirolo, 60 mm x 15 mm	Merck	P5481-500EA
Software, URL
ImmagineJ		Software per l'elaborazione delle immagini (intensità dei pixel, diametro del cerchio)
Terreni di coltura
Acqua di mare artificiale	0,41 m NaCl, 53 mM MgCl₂, 28 mM Na₂SO₄, 10 mM CaCl₂, 9 mM KCl , 2,4 mM NaHCO₃ ,0,84 mM KBr, 0,49 mM H3BO₃, 90 μM SrCl₂, 72 μM NaF
f/2 -liquido medio	acqua di mare artificiale, soluzione di oligoelementi allo 0,1 % (v/v), soluzione vitaminica allo 0,05 % (v/v), NaNO₃ 0,88 mM, NaH₂PO₄ 36 μM
Soluzione di oligoelementi	0,36 mM NaH₂PO₄, 12 μM Na₂EDTA, 39 nM CuSO₄, 26 nM Na₂MoO₄ , 77 nM ZnSO₄, 42 nM CoCl₂, 0,91 μM MnCl₂
Soluzione vitaminica	0,3 μM di tiamina-HCl, 2,1 nM di biotina, 0,37 nM di cianocobalamina