Preparazione di una coltura anaerobica di fanghi in condizioni prive di ossigeno

Abstract

Fonte: Wagner, A. O., et al., Preparazione media per la coltivazione di microrganismi in condizioni strettamente anaerobiche/anossiche. J. Vis. Exp. (2019)

Questo video mostra la preparazione e l'inoculazione di colture anaerobiche utilizzando fanghi privi di ossigeno in condizioni rigorosamente controllate e deossigenate.

Protocollo

Inoculazione del terreno

1. Preparare l'inoculo dal digestore anaerobico.
   1. Aggiungere 400 ml di acqua distillata in un pallone e portarlo a ebollizione.
   2. Raffreddarlo (< 30 °C) mentre si risciacqua permanentemente lo spazio di testa con N₂.
   3. Aggiungere circa 100 g di fango derivato da un digestore anaerobico.
      NOTA: Evitare un contatto eccessivo dei fanghi con l'ossigeno.
   4. Registrare l'esatta massa dei fanghi aggiunti per determinare esattamente la diluizione.
   5. Sostituire lo spazio di testa del pallone con N₂ e chiuderlo con un setto di gomma butilica.
   6. Agitare il pallone per 30 minuti a 120 giri/min.
2. Rimuovere 5 mL di inoculo utilizzando una siringa + cannula e iniettarlo nelle fiasche di siero preparate.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Palloni di coltura (120 mL, N20)	Ochs, Germania	102046
Setti in gomma butilica (N20)	Ochs, Germania	102049
Tappi in alluminio (N20)	Ochs, Germania	102050
N₂ gas	Messer, Austria		Purezza 5.0
Siringhe + cannule	diverso
Crimpatrice	Ochs, Germania	102051
De-crimper	Ochs, Germania	102052
GC2010	Shimadzu