Analisi istologiche ed ematologiche per valutare gli effetti del bacillo subtilis nei ratti sottoposti a stress termico

Abstract

Fonte: Sorokulova, I., et al. Prevenzione degli effetti avversi da stress termico nei ratti da parte del ceppo Bacillus subtilis. J. Vis. Exp. (2016)

Questo video presenta analisi istologiche e microscopiche del sangue utilizzate per valutare gli effetti protettivi di Bacillus subtilis nei ratti esposti allo stress termico.

Protocollo

1. Analisi istologica

1. Preleva campioni di intestino tenue da ogni ratto sperimentale tramite una procedura chirurgica. Fissare i campioni nel Fissativo di Bouin, inserirli nella paraffina, preparare sezioni da 6 μm e colorare le sezioni con ematossilina ed eosina utilizzando procedure standard.
2. Utilizzare un microscopio ad alta risoluzione per misurare l'altezza dei villi intestinali e lo spessore totale della mucosa in ogni campione (ingrandimento 100X). Analizza 4 campioni di ciascun ratto e effettua almeno venti misurazioni in ciascun campione. Risultati espressivi in micrometri.

2. Microscopia lucica ad alta risoluzione del sangue

1. Utilizzare una piattaforma di isolamento vibrazionale come base per il sistema di microscopio e per la videocamera e il computer per registrare le immagini in tempo reale. Calibra le immagini di prova usando una diapositiva Richardson.
2. Posizionare 7 μl di sangue appena prelevato da ogni ratto su un vetrino di vetro, un copertino, fotografare e registrare dieci fotogrammi di 72 × 53,3^{μm 2} in ogni campione (ingrandimento 1.700X).
3. Misurare la concentrazione delle vescicole utilizzando software che fornisce immagini ottiche ad alta risoluzione a vista diretta in tempo reale. Esamina almeno 20 fotogrammi per ogni condizione sperimentale.

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)	Sigma-Aldrich, St. Louis, MO	P4417
Il fissativo di Bouin	Scienze della Microscopia Elettronica, Hatfield, PA, USA	15990
Slide di prova Richardson	Scienza della Microscopia Elettronica, Hatfield, PA, USA	80303
Videocamera Sony DXC-33	Sony
Sistema ottico per microscopio luminoso	CitoViva Technology Inc., Auburn, AL
Software Image-Pro Plus	Media Cybernetics, MD, USA